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乙型肝炎病毒（Hepatitis B Virus,HBV）感染可引起急性和慢性乙型肝炎,是导致肝硬化、肝癌等严重肝脏疾患的最主要原因之一。治疗慢性乙肝的关键是抑制HBV DNA的复制,以减少肝脏并发症的出现。过去十几年,核苷类似物的出现使乙肝的治疗有了重要的进展,然而长期用药引起耐药性病毒变异株的出现限制了它们的临床效果。因此,发现新机制的抗乙肝药物一直是我国药物研究的重点之一。美国FDA（食品药品管理局,Food and Drug Admistraton）批准的抗HBV核苷类药物主要作用于HBV DNA聚合酶,长期应用诱导其发生耐药性突变。而病毒的复制过程需宿主细胞蛋白的帮助,因此寻找病毒所必需,而宿主细胞生存非必需的蛋白有可能成为发现抗HBV药物的新靶点。以往研究表明分子伴侣热休克蛋白Heat shock cognate 70（Hsc70,HspA8）可能是HBV复制的一个重要辅助蛋白,我们认为该蛋白有可能成为HBV多聚酶之外的一个抗HBV的新药物靶点。为了证明这个结果,我们设计了以下实验。将外源性Hsc70导入稳定表达HBV的2215细胞,使Hsc70基因高表达,结果使细胞内HBV复制增加了1.8倍;将特异性Hsc70 siRNA转染2215细胞,HBV复制显著降低,并且没有细胞毒性。以上结果表明,宿主Hsc70是HBV复制所必需的一个蛋白,而对宿主细胞的生长并不是必需的因素。通过筛选,我们首次发现我国天然化合物苦参素（Oxymatrine,OMTR;MW:264.31）能特异性下调肝细胞Hsc70的表达,在体内外均具有明确的抗HBV疗效,并且不影响HBV多聚酶的活性,也基本没有细胞毒性。OMTR是从中药苦豆子和苦参等中药中提取出来的一种生物碱,是具有明确化学结构的天然化合物,有多种药理作用。OMTR在我国已经有十几年的临床应用历史,主要用于抗肝炎的治疗,其疗效和安全性均得到普遍认可,但作用机理一直不清楚。上述研究为阐明OMTR的分子机理提供了重要的线索。我们进一步的研究表明,OMTR能使细胞中Hsc70 mRNA的降解速度明显加快,使其半衰期(T1/2)缩短一半以上,说明OMTR主要在转录后水平通过降低Hsc70 mRNA的稳定性来下调其表达。OMTR降低Hsc70 mRNA稳定性的机制与mRNA的3’UTR结构有关。我们将Hsc70 5’UTR及3’UTR全长分别插入到pLuc中Luc报告基因的上下游的5’端和3’端形成重组质粒,将这些质粒瞬时转染肝细胞后用OMTR处理,再分析含有Hsc70 3’UTR或5’UTR的肝细胞内Luc mRNA的水平。结果显示插入3’UTR后细胞内Luc mRNA的基础表达水平明显下降,而5’UTR则对Luc mRNA无影响。这说明Hsc70 mRNA3’UTR是OMTR的反应元件。OMTR可以有效地抑制临床野生株和变异株HBV DNA复制中间体的形成,从而抑制HBV复制,而对HBV RNA没有影响,由此我们得出了OMTR抗HBV的分子机理全图。由于OMTR通过作用于宿主降低Hsc70的表达水平来抑制HBV复制,我们推测这种作用机制的药物不易引起HBV耐药。我们分别用OMTR,3TC（Lamivudine,拉米夫定）及OMTR和3TC的联合同时作用于2215细胞,连续处理细胞8个月。结果显示,OMTR持续抑制HBV DNA的水平,3TC单独给药在第3个月出现病毒反跳,而OMTR和3TC联合给药不仅使细胞中HBV DNA持续降低而且还防止了HBV耐药的发生。与HIV治疗药物相比,尤其在联合化疗方面,对于HBV并没有一种理想的联合治疗方案,主要原因是由于核苷类似物抗HBV作用靶点的单一性。鉴于OMTR通过与核苷类似物不同的机理来抑制HBV复制,我们探索了OMTR、PFA（Foscarnet sodium,磷甲酸钠）与ADV（Adefovir Dipivoxil,阿德福韦酯）联合进行抗HBV治疗的可能性。我们用OMTR、PFA和ADV矩阵组合,处理2215细胞,7天后,结果显示,与单独给药相比,剂量比例适当的联合给药处理的细胞中HBV DNA总量减少更为显著,明显优于OMTR、PFA和ADV单独给药,为今后联合化疗提供了基础。对于慢性乙型肝炎（CHB）患者的临床研究表明,OMTR 0.4g每天2次口服给药治疗12个月后,能使17例对3TC耐药的CHB患者血清HBV DNA和HBeAg浓度分别下降96%和70%,效果与20例初次治疗的CHB患者相当。所有患者在用OMTR治疗后未出现明显不良反应。反映肝功能指标的ALT、AST、γ-GT,与用药前相比,显著降低（ALT,AST,γ-GT:p＜0.001）,表明CHB患者肝功能明显改善。临床肝组织活检的结果表明,OMTR在抑制肝脏组织HBV载量的同时也显著降低了组织中Hsc70的表达水平,进一步在人体证实了OMTR通过宿主Hsc70抑制HBV复制的机制。在进一步的研究中,我们发现对于CHB患者,单用3TC治疗12个月,发生耐药的几率为7/25;而用OMTR与3TC联合治疗12个月后发生耐药的几率仅为1/15（3TC vs 3TC/OMTR,p＜0.01）。我们的该项研究包括了从分子水平到细胞水平,到临床试验等一系列工作。结果表明,细胞蛋白Hsc70在HBV复制中起重要作用,是一个新的抗HBV靶点;OMTR是一种安全可靠的具有新型机制的抗乙肝病毒的药物,其作用机制与核苷类似物完全不同,它通过降低宿主Hsc70表达来抑制病毒复制;OMTR抗HBV的特点表现为不会对病毒产生化疗压力,因此可以避免诱导耐药变异的发生。我们认为OMTR可单独或与核苷类似物联合应用于临床,治疗慢性乙肝患者,以解决HBV的耐药问题。