【摘 要】
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目的探讨超声微泡介导基因转染面神经的可行性及有效性。方法建立小鼠面神经损伤模型,以增强型绿色荧光蛋白质粒(pEGFP)为标记基因。将48只小鼠随机分为6组:空白组(A组)、脂
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目的探讨超声微泡介导基因转染面神经的可行性及有效性。方法建立小鼠面神经损伤模型,以增强型绿色荧光蛋白质粒(pEGFP)为标记基因。将48只小鼠随机分为6组:空白组(A组)、脂质体+质粒组(B组)、微泡+质粒+超声组(C组)、微泡+质粒组(D组)、超声+质粒组(E组)、单纯质粒组(F组)。将小鼠面神经损伤后,局部注射吸附pEGFP质粒的微泡,行超声辐照,3天后,取出面神经干行快速冰冻切片,激光共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope ,LSCM)下观察各组绿色荧光蛋白的表达,并行平均荧光强度分析,并采用western blot法检测面神经干绿色荧光蛋白的表达。同时在激光共聚焦显微镜下观察各组小鼠脑干绿色荧光蛋白表达。结果C组(微泡+质粒+超声组)面神经干平均荧光强度最强,其次分别为B组(脂质体+质粒组)、E组(超声+质粒组)、D组(微泡+质粒组)、F组(单纯质粒组)、A组(空白组)。C组与其他各组两两比较有统计学意义(P<0.05或0.01)。脑干尚未发现面神经核团有明显绿色荧光蛋白表达。结论超声介导的微泡作为损伤面神经转染的携带工具比非病毒类基因载体有更高的转染效率。微泡能够有效地与目的基因质粒相吸附,在一定强度及频率超声的空化作用下,能够将目的基因转染进入损伤后的面神经。超声辐照介导的微泡空化破裂过程、基因转染及表达的过程,对损伤后的面神经不构成致死性的损伤。说明微泡在超声的作用下能够安全、有效地将目的基因转染进入损伤后的面神经。
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