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背景:人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)具有嗜表皮性和粘膜性,能够引起人体皮肤和粘膜的多种良恶性疾病。近年来,与HPV感染相关性疾病的发病率不断增长,且该类疾病具有高复发性,因而倍受关注。临床显示孕妇尖锐湿疣的增长速度明显高于同类疾病的其他人群,其发生机理尚不清楚。 目的:通过检测不同分组条件下细胞吸光值的变化,探讨雌激素与HPV感染在诱导人永生化上皮细胞HaCaT增殖中是否具有协同作用。 方法:本试验通过体外培养人永生化上皮细胞HaCaT,将带有绿色荧光蛋白的HPVl6E6E7重组质粒与空载质粒分别转染入人永生化上皮细胞HaCaT中。首先采用蛋白印迹法(Western blot)验证转染后蛋白的表达情况,然后将转染成功的细胞进行实验分组,分别为HPV16E6E7-HaCaT细胞(简称质粒组)、空载质粒-HaCaT细胞组(简称空载组),两组间进行比较用以消除空载质粒对细胞的影响,从而能为更准确地反应质粒的作用提供前提。最后将实验分为四组,分别是HaCaT细胞组(简称正常组)、HPV16E6E7-HaCaT细胞(简称质粒组)、HaCaT+雌激素组(简称激素组)、HPV16E6E7-HaCaT细胞+雌激素组(简称联合组),采用Cell Counting Kit-8(CCK-8),检测各组细胞的吸光度值,采用统计学方法处理比较各组之间的差异是否有统计学意义。 结果:将HPV16E6E7重组质粒和空载质粒分别转染入人永生化上皮细胞HaCaT后,经Western blot法证实质粒组与正常组、空载组相比较,质粒组低表达p53,pRb。在不同分组条件下,用CCK-8检测发现,正常组细胞吸光度值为1.07±0.07,质粒组细胞吸光度值为1.17±0.06,雌激素组细胞吸光度值为1.15±0.08,联合组细胞吸光度值为1.27±0.04,正常组、质粒组、雌激素组分别与联合组比较均P<0.05,有统计学意义。 结论:在体外雌激素与HPV16能够有效地协同促进人永生化上皮细胞HaCaT的增殖。