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血管形成因子是一类能诱导和促进毛细血管形成的物质,目前已经发现30多种重要的血管形成因子。VEGF(血管内皮生长因子)和bFGF(碱性成纤维母细胞生长因子)是其中两种不同的、重要的血管形成因子。VEGF又称血管渗透因子(VPF),是目前所知道的最强烈的直接作用于血管的内皮细胞生长因子。VEGF的生物学作用主要为:1、促进血管内皮细胞增殖; 2、提高血管的通透性;3、改变细胞外基质,使其易于血管生长;4、与肿瘤的生长及多种疾病的发生密切相关。其作用机制为:细胞分泌的VEGF选择性的作用于血管内皮细胞膜上的VEGF受体,调控内皮细胞分化和血管形成。VEGF的表达与组织中微血管的密度及新生血管数量密切相关。bFGF是一种多肽类血管形成因子。研究表明它的许多种类是调节细胞增殖所需的生长因子。目前研究的最为深入的是酸性(a)和碱性(b)FGF两种,bFGF对酸和热敏感,等电点呈碱性,故称为碱性纤维母细胞生长因子。bFGF 的生物活性是aFGF的10—100倍。bFGF的生物学作用非常广泛:1、能诱导中胚层的形成,具有促进形态学发生和有丝分裂的作用;2、促进胚胎早期肌母细胞增殖,延缓肌母细胞分化;3、在组织重建、胚胎发育和肿瘤发展过程中,具有促进血管内皮细胞增殖的作用。作用机制:bFGF<WP=4>与其受体结合后触发一系列信号级联传导系统,最终将细胞外信号传入核内,导致细胞增殖反应。血管瘤是婴幼儿最常见的良性肿瘤,发病率约为3-8%。它可以出现在人体的各个部位,以皮肤皮下组织最为多见,其次可见于口腔粘膜、肌肉,也可发生于骨骼、内脏、大脑等器官和组织。目前,临床上常将血管瘤分为:毛细血管瘤 、海绵状血管瘤、蔓状血管瘤 和混合性血管瘤。其中毛细血管瘤具有快速生长的特点,特别是一岁以内。尽管血管瘤是良性的,但它能破坏周围组织;有些血管瘤呈侵润性生长,从而造成儿童的美容缺陷。尤其是大约50%的血管瘤位于头面部,必将给患儿及家长带来极大的精神和心理负担。血管瘤的基础结构是由扩张增生的血管或充满血液的内壁和腔窦所组成,并由纤维组织和脂肪形成间隔和支持结构。它的最主要特征是毛细血管内皮细胞的增生。其自然病程包括增生期、静止期和消退期。毛细血管瘤确切的发病机制仍不清楚,近年来研究表明,血管形成因子在血管形成中起重要作用。目前,已知血管形成的中心包括:细胞外基质的蛋白分解;内皮细胞的增生、移行;细胞外基质的产生;血管状结构的形成和再通。在这个过程中,内皮细胞、血管形成因子、细胞外基质等均起到重要作用。平阳霉素是一种抗肿瘤药物,其作用机理为:直接损伤内皮细胞DNA的合成,阻止胸腺嘧啶掺入DNA,并与之结合。研究表明,平阳霉素是一种有效的抑制血管瘤增生,促进其消退的药物。 据以上资料我们可以推测:平阳霉素可能在细胞水<WP=5>平抑制VEGF和bFGF的生成与表达,以达到治疗血管瘤的目的。为此我们进行严格的课题设计, 对增殖期毛细血管瘤瘤体标本中VEGF、bFGF的表达水平进行测定,探讨平阳霉素乳剂对增殖期毛细血管瘤瘤体中VEGF,bFGF的影响。目的:本课题的目的是探讨抗肿瘤药物平阳霉素乳剂对增殖期毛细血管瘤组织中血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)和碱性纤维母细胞生长因子(basic fibrolast growth factor, bFGF)表达的影响,从细胞学水平对平阳霉素抑制血管瘤生长,促使其退化的机理作出科学的解释,更好的为临床应用平阳霉素治疗血管瘤提供理论依据与指导。方法:1、选择处于增殖期的草莓状毛细血管瘤患儿30例(术后瘤体标本经病理切片证实为毛细血管瘤),将患儿随机分为对照组和用药组,其中对照组10例,用药组20例,用药组手术前平均使用平阳霉素乳剂5-7天。平阳霉素乳剂由平阳霉素被生理盐水溶解后加入基质配制而成,基质中含有硬脂酸、凡士林等成分,平阳霉素药物浓度为2mg/ml。2、采用SABC免疫组织化学方法检测瘤体组织中VEGF和bFGF蛋白的表达。以PBS代替一抗作阴性对照,阳性对照片为乳腺癌组织。3、VEGF、bFGF的兔多克隆抗体组织化学染色显示血管内皮细胞的细胞膜和(或)胞浆染成棕黄色为阳性细胞。在400倍显微镜下随机观察5个视野,计数500个内皮细胞中染色阳性的细胞个数,参考1996年5月在北京举办<WP=6>的“全国免疫组织化学技术与诊断标准化专题研讨会”,按阳性细胞所占比例进行分级:0-25%(-);26%-50%(+);51%-75%(++);76%-100%(+++)。4、统计学处理:所测数据用成组设计的两个样本比较的秩和检验进行检验测量,P<0.01认为两组间有显著性差异。结果:免疫组化染色显示:1、用药组瘤体组织中VEGF蛋白的表达水平比对照组明显降低,染色明显减弱,两组之间的VEGF表达经统计学处理后有显著性差异(Hc= 6.9630 P<0.01)。2、瘤体中bFGF蛋白的表达水平在用药组和对照组中都呈高表达,两组之间无显著性差异(Hc=0.0587 P>0.01)。结论:1、平阳霉素乳剂可降低增殖期毛细血管瘤体组织中VEGF的表达,在细胞学水平上为平阳霉素的临床应用提供了全新的理论依据。2、在本课题的研究中,平阳霉素乳剂未对瘤体组