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【目的】建立膜滤过(isolation by size of epithelial tumor cells, ISET)联合激光扫描细胞计量仪(laser scanning cytometry, LSC)检测循环肿瘤细胞(circulating tumor cells, CTC)的方法,并运用该方法检测肿瘤患者CTC,初步探讨CTC检测在乳腺癌患者中的临床应用价值。【方法】(1)将不同数量人乳腺癌细胞株(MCF-7)混入7.5ml健康志愿者血标本中以模拟肿瘤患者的血样,用ISET方法对MCF-7完成富集后,以抗细胞角蛋白8(cytokeratins 8,CK8)抗体和白细胞共同抗原CD45分别对MCF-7进行阳性选择和阴性选择,CK8(+)CD45(-)细胞即为阳性细胞,通过LSC扫描计数并目测确认,肿瘤细胞水平以肿瘤细胞检出数／7.5ml血表示。计算4次敏感性实验的肿瘤细胞回收率以验证该方法的稳定性和敏感性,同时检测16例健康志愿者血标本验证该方法的特异性。(2)应用上述方法检测92例晚期乳腺癌患者及134例早期乳腺癌患者CTC水平。(3)分析CTC水平与乳腺癌患者的临床分期、淋巴结转移、激素受体及HER-2状态等临床病理特征的相关性并探讨手术、化疗等干预措施对CTC水平的影响。【结果】(1)4次敏感性实验全部样本回收率为15.45±1.26%,血样本中加入肿瘤细胞数量越多,检出肿瘤细胞数也越多。含不同数目肿瘤细胞的各样本组回收率之间比较差异无统计学意义(P>0.05),应用该方法可检测到lml血中一个肿瘤细胞。(2)226例乳腺癌患者,包括92例晚期乳腺癌患者及134例早期乳腺癌患者,共抽取492个血标本,其中297个血标本(60.36%)可检测到CTC,平均检出数为3.76个／7.5ml血。16例健康志愿者血标本均未检测到CTC。(3)85例具有明确分期的乳腺癌患者,随着患者临床分期的升高(Ⅰ-Ⅳ期),CTC检出数越高(x+SD分别为1.61±1.73、3.00±2.75、4.60±3.76、6.30±5.15个／7.5ml血,P<0.05),CTC检出率也越高(分别为46.43%、57.89%、66.67%、78.26%,P<0.05)。组间比较后,其中除Ⅱ期与Ⅲ期间CTC检出数差异未见统计学意义外,余各分期间CTC检出数及检出率差异均有明显统计学意义。(4)134例早期乳腺癌患者,HER-2表达阳性患者的CTC检出率高于HER-2表达阴性患者(HER-2阳性／阴性患者检出率42.53%vs23.40%,P=0.028)。CTC检出水平与淋巴结转移、肿块大小、激素受体状态及肿瘤分化程度等未见相关性(P>0.05)。(5)24例手术前后检测CTC的乳腺癌患者,术前有10例(41.67%)患者可检测到CTC(x=2.254个/7.5ml血),术后3-4天有13例(54.17%)患者可检测到CTC(x=5.63个／7.5ml血,P<0.05),术后一周CTC计数下降至术前水平(x=3.67个／7.5ml血,P>0.05),术后约一月患者CTC仍维持在术前水平(x=2.23个／7.5ml血,P>0.05)。(6)92例晚期乳腺癌患者在治疗过程中检测CTC水平发现：治疗后CTC水平降低与影像学观察到的肿块体积缩小有明显相关性(Spearman相关系数r=0.50579,P<0.05)。【结论】ISET联合LSC检测CTC方法稳定性好,重复率高,有较高的敏感性和特异性；随着乳腺癌患者分期增高,CTC检出水平亦增高；HER-2表达阳性患者CTC检出水平显著高于HER-2表达阴性患者；CTC可作为预测乳腺癌患者治疗反应一个重要指标。