【摘 要】
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研究目的:利用肌管细胞碎片体外处理RAW264.7巨噬细胞,并通过Transwell细胞小室建立巨噬细胞与成肌细胞共培养体系,研究骨骼肌损伤后肌细胞碎片对于巨噬细胞极化的影响,以及巨噬细胞与成肌细胞共存时对成肌细胞成肌分化和巨噬细胞极化的相互影响,从而为骨骼肌损伤后的肌细胞修复和重塑的机制提供理论指导。研究方法:以小鼠C2C12成肌细胞和RAW264.7巨噬细胞作为研究对象;（1）利用肌管细胞碎片
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研究目的:利用肌管细胞碎片体外处理RAW264.7巨噬细胞,并通过Transwell细胞小室建立巨噬细胞与成肌细胞共培养体系,研究骨骼肌损伤后肌细胞碎片对于巨噬细胞极化的影响,以及巨噬细胞与成肌细胞共存时对成肌细胞成肌分化和巨噬细胞极化的相互影响,从而为骨骼肌损伤后的肌细胞修复和重塑的机制提供理论指导。研究方法:以小鼠C2C12成肌细胞和RAW264.7巨噬细胞作为研究对象;（1）利用肌管细胞碎片处理巨噬细胞不同时长（4h、4h×2、24h）,相差显微镜观察细胞形态、CCK-8检测细胞活性、流式细胞术检测F4/80、CD86、CD206细胞极化标志性蛋白探究碎片处理的最佳时长。（2）经碎片干预的巨噬细胞与成肌细胞分为三组进行共培养,C组:对照组;CM组:C2C12+巨噬细胞组;CMp组:C2C12+经细胞碎片处理的巨噬细胞组（预制的肌管碎片以5:1比例干预4h后）;共培养时观察细胞形态,共培养5d后CCK-8检测各组细胞增殖情况、免疫荧光Myogenin染色统计肌管面积、Western Blotting检测C2C12成肌相关蛋白MyoD和Myogenin表达。巨噬细胞分为4组进行共培养,M组:对照组;Mp组:经细胞碎片处理的巨噬细胞组;MC组:巨噬细胞+C2C12组;MpC组:经细胞碎片处理的巨噬细胞组+C2C12细胞;共培养2d后收集细胞进行Western Blotting检测炎症因子IL-1β、IL-10蛋白表达、M1M2型标志性蛋白iNOS、Arg-1蛋白表达以及检测Akt磷酸化水平。研究结果:（1）在肌管细胞碎片处理巨噬细胞4h、4h×2、24h后,观察细胞形态和流式检测巨噬细胞极化标志蛋白,细胞形态在4h组激活程度最明显,M1型极化标志性蛋白激活程度最显著（P<0.05 vs M0组）。（2）通过将吞噬肌管细胞碎片的巨噬细胞与C2C12细胞共培养,通过显微镜观察和免疫荧光Myogenin染色发现与巨噬细胞共培养的CM组和CMp组肌管面积和融合程度明显升高,CCK-8检测和Western Blotting结果显示与肌管碎片激活的巨噬细胞共培养后,C2C12细胞增殖显著升高（P<0.05 vs C组）,MyoD和Myogenin蛋白表达显著升高（P<0.05 vs C组）。（3）与C2C12细胞共培养后,巨噬细胞促炎因子IL-1β和抗炎因子IL-10分泌显著升高（P<0.05 vs M组）,iNOS作为M1型巨噬细胞标志性蛋白,表达显著升高（P<0.05 vs M组）,同时检测Akt磷酸化并未升高。研究结论:（1）肌管细胞碎片干预4h左右,巨噬细胞极化为M1型并且M1型细胞比例达到高峰。（2）激活的巨噬细胞可以促进成肌细胞增殖分化,同时成肌细胞促进激活的巨噬细胞继续向M1型极化,二者共同作用促进骨骼肌肌细胞的再生和重塑。
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