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研究背景和目的胃癌（gastriccancer,GC）是消化系统最常见的高度恶性肿瘤之一。在中国,大部分胃癌患者诊断时已位于进展期。大约30%-80%的进展期胃癌患者,即使接受了手术治疗为主的综合治疗,依然会出现复发,而且这部分胃癌患者的预后往往表现极差。并且,术后越是早发生复发,往往预后越差。在能接受根治性手术的患者中,Ⅲ期患者的复发率最高。在预测复发的问题上,目前临床上用年龄、肿瘤大小、肿瘤侵犯深度、Borrmann分型、淋巴结清扫范围、转移淋巴结数量等等来作为胃癌复发的临床预测因子。而仅仅凭借这些指标,难以得到对胃癌的早期复发的精准预测。环状RNA（circRNA）近年来被发现是广泛存在的RNA形式之一。CircRNA不同于传统的线性RNA,其不具有5’ 末端帽子结构和3’ 末端和polyA尾巴结构。目前已经发现circRNA在乳腺癌、结直肠癌、肝癌等多种癌症中都发现有异常表达,circRNA可以作为肿瘤的生物标记物。CircRNA基因芯片技术是目前研究circRNA表达谱的一种理想有效的方法,可以快速、准确的找出需要的相关circRNA。本研究利用circRNA芯片对Ⅲ期胃癌病例进行分析,试图寻找Ⅲ期胃癌相关的circRNA和Ⅲ期胃癌早期复发相关的circRNA,并进一步对在肿瘤中低表达的circRNA100269进行初步的功能分析,且试图寻找其下游靶点,明确其作用的分子通路。研究方法本研究第一步提取Ⅲ期胃癌患者的手术切除肿瘤组织和癌旁正常黏膜的RNA,通过circRNA基因芯片技术,得到期胃癌circRNA的差异表达谱,并从中筛选Ⅲ期胃癌早期复发的相关circRNA;再进一步将筛选出来的circRNA,应用qRT-PCR验证芯片结果,并建立预测Ⅲ期胃癌早期复发的模型。并对胃癌中低表达的circRNA:hsacircRNA100269,采用质粒构建技术,增加胃癌细胞株circRNA100269的表达,观察其对胃癌细胞株增殖的影响,并进一步探讨其下游作用机制。研究结果本研究通过circRNA芯片技术确定了 46个Ⅲ期胃癌相关circRNA和8个Ⅲ期胃癌早期复发相关circRNA。进一步的,通过qRT-PCR技术检测了芯片确定的Ⅲ期胃癌早期复发相关circRNA在组织中的表达。通过Cox回归模型,发现circRNA101308、circRNA104423、circRNA104916、circRNA100269 是Ⅲ期胃癌早期复发的独立危险因子。进一步建立了危险度评分模型,得到危险度评分=（1.434×circRNA101308）-（0.917× circRNA104423）-（1.042×circRNA104916）-（1.201×circRNA100269）。通过训练组和测试组对模型进行验证,得出两组的HR分别可以达到6.248（95%CI 2.534-15.403）,p=0.000069 和 4.886(95%CI 1.375-17.359,p=0.014,ROC 的曲线下面积可以达到 0.763（95%CI 0.632-0.894）,p=0.001 和 0.711（95%CI 0.558-0.863）,p=0.018。我们进一步联合上述模型和传统TNM分期,得到一个新的预测模型,新危险度评分=2.709 × circRNA模型危险度评分+ 1.432 × T分期+ 0.678 × N分期。训练组和测试组两组中HR分别为22.156（95%CI = 5.143-95.150）,p =0.000032 和 21.601（95%CI = 2.830-164.902）,p = 0.003。ROC 分析显示两组的曲线下面积分别为 0.866（95%Cl = 0.769-0.962）和 0.818（95%Cl = 0.698-0.938）。我们得到的这两个预测方程的可靠性较好,能够满足对Ⅲ期胃癌术后早期复发的风险预测。本研究通过qRT-PCR技术表明circRNA100269在胃癌组织中低表达,其相对应的线性基因LPHN2在胃癌中的表达也显著降低。本研究还通过生物信息学方法预测了 circRNA100269 的下游靶向 miRNA,miR-605-3p 和 miR-630。通过组织qRT-PCR验证了 miR-630的表达与circRNA100269成负相关性。进一步的,通过双荧光素酶报告系统实验证明了 circRNA100269与miR-630在胃癌细胞内存在直接的相互作用。通过circRNA100269的转染实验证明,circRNA100269确实可以抑制胃癌细胞的增殖,而该功能可以被其下游靶向miR-630所抑制。研究结论Ⅲ期胃癌中的circRNA发生了显著的异常表达,我们通过芯片鉴定了一定数量的Ⅲ期胃癌相关基因和Ⅲ期胃癌早期复发相关基因。进一步通过qRT-PCR验证并建立了预测Ⅲ期胃癌早期复发的模型。CircRNA100269是一种在胃癌中显著低表达的circRNA,其可以与miR-630直接结合并调控胃癌细胞的增殖过程。