【摘 要】
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在过去的几十年里,癌细胞对化疗药物的耐药性不断增加,加上有害的副作用,增加了开发新的抗癌药物的紧迫性。与传统放化疗相比,基于多肽的肿瘤靶向治疗具有高特异性和低副作用等优点。为改善抗肿瘤多肽稳定性差的问题,同时提高其肿瘤靶向性,我们选择嵌合蛋白设计来实现这一目的。在本研究中,我们首先采用大环寡肽MCoTI-I作为嵌合多肽的载体。我们利用内含肽介导的蛋白质反式剪接技术在大肠杆菌中表达了天然胰蛋白酶抑制
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在过去的几十年里,癌细胞对化疗药物的耐药性不断增加,加上有害的副作用,增加了开发新的抗癌药物的紧迫性。与传统放化疗相比,基于多肽的肿瘤靶向治疗具有高特异性和低副作用等优点。为改善抗肿瘤多肽稳定性差的问题,同时提高其肿瘤靶向性,我们选择嵌合蛋白设计来实现这一目的。在本研究中,我们首先采用大环寡肽MCoTI-I作为嵌合多肽的载体。我们利用内含肽介导的蛋白质反式剪接技术在大肠杆菌中表达了天然胰蛋白酶抑制剂类大环寡肽MCoTI-I,经评价显示,得到的大环寡肽MCoTI-I具有胰蛋白酶抑制活性、高热稳定性及血清稳定性、低细胞毒性以及具有细胞通透性等优点,可以作为优秀的多肽药物载体框架。然后利用MCoTI-I作为框架,将抗肿瘤活性多肽GPx1-B2嵌合到MCoTI-I的环6中,设计了抗肿瘤嵌合大环寡肽MCoGPx1-B2的结构序列并进行表达,以提高抗肿瘤多肽的稳定性及细胞膜穿透性。经评价显示嵌合大环寡肽MCoGPx1-B2仍然具有胰酶抑制活性及热稳定性。第二部分研究中,我们以西妥昔单抗的人源化单链抗体anti-EGFR husc Fv为靶向载体,与抗肿瘤多肽ZXR-2融合,设计了抗肿瘤生物活性嵌合蛋白anti-EGFR husc Fv-ZXR2,并通过对包涵体进行纯化复性得到了高纯度复性蛋白。细胞毒性、血清稳定性、活死细胞染色以及荧光染料标记等实验结果表明,设计的嵌合蛋白anti-EGFR husc Fv-ZXR2不仅保留了anti-EGFR husc Fv对EGFR的靶向识别功能,而且保留了多肽ZXR-2通过裂解肿瘤细胞的细胞膜来杀死肿瘤细胞的特性,具有双重抗肿瘤效果,可以克服临床上可能出现的耐药性。这种sc Fv-ACLP融合蛋白具有良好的稳定性和强大的抗癌活性,还具有癌症治疗的双相效应,因为ZXR-2代表对癌细胞的快速作用,而anti-EGFR husc Fv对癌细胞增殖具有长效抑制。综上所述,本课题采用两种多肽药物框架为载体,构建了嵌合抗肿瘤生物活性蛋白,并采用生物表达的方式,获得具有肿瘤靶向且稳定性较好的抗肿瘤生物活性嵌合蛋白,为提高抗肿瘤多肽的稳定性及靶向功能提供了新的思路。
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