全反式维甲酸(ATRA)通过诱导细胞分化、清除白血病起源细胞,在临床上广泛地用于治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)。虽然初发APL的病人经ATRA治疗后大部分得以缓解,但是由于病人很快对ATRA产生耐药导致疾病复发。ATRA的应用仅仅局限于存在染色体t(15:17)异位而产生融合基因PML-RARα的APL,对其他类型的白血病疗效并不理想。维甲酸受体alpha(RARα)在与ATRA结合后发挥转录功能的同时发生降解,亦削弱了ATRA诱导分化的能力。解决这些问题有效方法之一是采取联合用药的策略。ATRA/As2O3的联用成功地解决了ATRA耐药的问题,在临床上有效地治愈了APL。本文发现新型天然二萜类化合物川藏香茶菜乙素(pharicin B)能够在AML细胞系以及初发AML病人的原代细胞中稳定RARα和PML-RARα蛋白质,在此基础上,我们试图发现pharicin B的生物学功能,以及证明pharicinB与ATRA联合用药的效果,并深入阐明其机制。本文主要取得如下研究成果:　　 (1)Pharicin B在AML白血病细胞中稳定RARα蛋白质。在AML细胞系、原代细胞中,非毒性剂量的pharicin B能够在蛋白质水平上明显地上调RARα,而mRNA没有明显的变化。Pulse-chase实验证明pharicin B能够明显地延长RARα蛋白质的半衰期。在NB4细胞中,融合蛋白质PML-RARα也同时被Pharicin B稳定。PharicinB亦能够抑制ATRA引起的RARα、PML-RARα蛋白质的降解。　　 (2)Pharicin B在NB4细胞中增加RARα的转录活性。染色质免疫沉淀实验证明,Pharicin B能够稳定外源表达的RARα蛋白质,并且被稳定的RARα蛋白质结合到靶基因RARβ的启动子区域的维甲酸反应元件(RARE)上,在ATRA存在下,这种结合明显增加。实时荧光定量PCR实验证明pharicin B能够通过稳定RARα/PML-RARα蛋白质增强ATRA调控的一系列基因的转录表达。　　 (3)Pharicin B协同ATRA诱导白血病细胞系以及原代白血病细胞分化。尽管pharicin B单独只能诱导髓系白血病细胞发生弱分化,但是它能明显地增强ATRA以及RARα激动剂AM580的分化诱导效应。这种分化诱导效应能够被RARα的拮抗剂所抑制。在初发的髓系白血病细胞中pharicin B亦能够观察到这种分化增强效应。更为重要的是,pharicin B能够增加ATRA耐药细胞对ATRA的敏感性,协同ATRA诱导耐药细胞分化。　　 综上所述,依靠pulse-case,染色质免疫沉淀,流式细胞术等技术平台,本文第一次发现了单个的小分子pharicin B能够在蛋白质水平上稳定RARα及PML-RARα蛋白质。并且通过增加RARα蛋白质的转录活性增强ATRA诱导白血病细胞分化的能力。这种分化增强的效应在原代白血病细胞中也得到了验证。Pharicin B还能够恢复部分维甲酸耐药的急性早幼粒白血病(APL)细胞对ATRA的敏感性。这些发现进一步阐明了RARα/PML-RARα蛋白质在白血病的发病以及治疗中的作用,并且揭示了pharicin B/ATRA联合用药策略应用于治疗AML的可能性。