【目的】　　1. 构建并验证人原代皮脂腺细胞体外分化模型。　　2. iTRAQ分析筛选皮脂腺细胞分化相关蛋白。　　3. 通过体内外实验了解2个上调、2个下调的分化相关蛋白表达情况。　　【方法】　　1. 取5例正常人头皮标本，分离培养原代人皮脂腺细胞。　　2. 培养原代皮脂腺细胞待密度达50%，无血清皮脂腺细胞培养液饥饿处理24 h（D0），换用含2%血清培养液分别培养1~7 d（D1-7），构建皮脂腺细胞体外分化模型。流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡；透射电镜观察细胞超微结构和脂滴变化；油红O染色检测皮脂水平；蛋白印迹检测增生、分化和凋亡标志蛋白表达；iTRAQ分析筛选差异表达的分化相关蛋白。　　3. 挑选2个上调、2个下调的分化相关蛋白，蛋白印迹验证皮脂腺细胞中表达，免疫组化检测3例痤疮患者面部皮损及3例正常人面部皮肤中表达。　　【结果】　　1. 构建皮脂腺细胞体外分化模型：光镜观察显示细胞培养密度随分化时间逐渐增加。　　2. 体外分化模型中细胞周期及皮脂分泌情况：随皮脂腺细胞分化时间延长，流式细胞术显示G1期和凋亡期细胞比例增加，S期细胞比例减少；透射电镜观察显示胞质内脂质空泡增多、增大；油红O染色显示皮脂分泌逐渐增多。　　3. 体外分化模型中皮脂腺细胞增殖、分化、凋亡、皮脂分泌相关蛋白表达：增生标志物K5、分化标志物PPARγ分别在D0、D5-7皮脂腺细胞中表达，成脂基因（FoxO1、LXR、Sox9、SREBP1）和凋亡标志物（P53、P21）表达随细胞分化逐渐增多。　　4. 筛选分化模型中差异表达蛋白：iTRAQ发现3582个蛋白。与D0相比较，差异倍数大于±1.5的蛋白在D1为132个（上调80个、下调52个）；D3为54个（上调29个、下调25个）；D5为321个（上调123个、下调198个）；D7为96个（上调47个、下调49个）。在PubMed数据库中，以“protein and skin”为检索词查找文献，发现D7中有41个与皮肤功能相关的差异表达蛋白。　　5. 验证4个差异表达蛋白：选择了4个与角质形成细胞或皮脂腺细胞功能密切相关的4个差异表达蛋白作进一步验证，包括上调的S100钙结合蛋白P （S100P）、铁氧还蛋白还原酶（FDXR）上调及下调的腺苷脱氨酶（ADA）、K10。蛋白印迹显示FDXR和S100P在D5、D7细胞中表达增多，而ADA和K10主要在D0、D1细胞中表达。免疫组化发现痤疮皮损中 FDXR和S100P表达增多，K10表达减少，而ADA在正常皮肤和痤疮皮损中未见表达。　　【结论】　　1. 2%血清培养液可用于构建人原代皮脂腺细胞体外分化模型。　　2. 在皮脂腺细胞体外分化模型中，D0、D1-3、D5-7分别代表未分化、早期分化、晚期分化细胞。　　3. 皮脂腺细胞分化模型中共有3582个蛋白表达；与D0细胞相比，D1、D3、D5、D7细胞中差异表达蛋白数分别为132、54、321、96个。　　4. S100P、FDXR可能促进皮脂腺细胞分化，而K10、ADA可能参与皮脂腺细胞增殖。S100P、FDXR、K10可能在痤疮发病中起一定作用。