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研究目的：本课题以糖尿病动物(SD大鼠)模型为研究基点,通过观察正常对照组、糖尿病模型组、补中益气丸治疗组SD大鼠肝组织病理,检测三组肝组织自由基和α-甘露糖苷酶活性变化,初探益气健脾法干预糖尿病肝组织损害的作用机制。在动物实验研究的基础上,进一步分析糖尿病肝损害人群自由基和糖链相关指标(α-甘露糖苷酶、碱性磷酸酶糖链)变化及其与中医证型的相关性,初步探讨糖尿病肝损害的糖病理学机制,丰富糖尿病肝损害辨证论治的内涵。研究方法：①将36只SD大鼠分为3组,随机抽取1O只大鼠为正常对照组,造模成功的20只SD大鼠再随机分为糖尿病模型组(DM组)、补中益气丸治疗组,每组各10只。观察肝脏病理,检测肝组织α-甘露糖苷酶活性、MDA、ONOO-、NO3-水平,并作统计学处理、分析。②根据诊断标准、排除标准及纳入标准选择符合要求的病例,收集144例,其中正常对照组30例,糖尿病组30例,糖尿病肝损害组84例。凝集素亲和沉淀法检测并分析各组血清碱性磷酸酶的植物白细胞凝集素(L-PHA)、麦胚凝集素(WGA)、小扁豆凝集素(LCA)、豌豆凝集素(PSA)结合率,同时检测血清MDA、ONOO-、NO3-水平、α-甘露糖苷酶活性,分析以上各指标在不同组间的差异及相关性。③根据中医证型相关判定标准,确立糖尿病肝损害的证型,进行上述指标检测,并分析各指标在不同证型的差异。研究结果：1.动物实验部分：①肝组织病理学改变：DM组：肝小叶的结构--肝小叶结构欠完整；中央静脉淤血；肝索结构欠整齐；肝窦狭窄、扩张,散在Kupffer细胞；肝细胞水样变性,肝细胞内可见糖原颗粒及脂肪空泡,细胞核浅染。汇管区--结构欠完整,汇管区静脉、动脉可见大量红细胞聚集,胆管轻度胆汁淤积,间质水肿,可见炎性细胞浸润。补中益气丸治疗组：肝小叶的结构--肝小叶结构完整；中央静脉无扩张、充血；肝索结构整齐；肝血窦轻度狭窄；肝细胞内可见少量糖原颗粒。汇管区--汇管区结构完整,汇管区静脉、动脉轻度充血,胆管结构未见明显异常,间质可见少量炎性细胞浸润。②肝组织α-甘露糖苷酶活性：DM组较正常对照组显著降低(P<0.01),补中益气丸治疗后有所升高(P<0.05),但仍低于正常对照组(P<0.01)。③肝组织自由基水平：DM组肝组织中MDA、ONOO-、NO3-水平均较正常对照组显著增高(P<0.01),补中益气丸治疗后显著下降(P<0.05)。④肝组织α-甘露糖苷酶活性与MDA, NO3-、ONOO水平呈显著负相关(P<0.05)。2.临床实验部分：①血清自由基水平：糖尿病肝损害组血清MDA, ONOO-、NO3水平显著高于正常对照组、糖尿病组(P<0.01)；糖尿病组与正常对照组比较亦有统计学差异(P<0.01或0.05)。②血清α-甘露糖苷酶活性：正常对照组、糖尿病组、糖尿病肝损害组血清α-甘露糖苷酶活性呈逐渐降低的趋势,经统计学比较,糖尿病肝损害组显著低于正常对照组、糖尿病组(P<0.01),糖尿病组与正常对照组比较亦有统计意义(P<0.05)。相关性分析显示：血清α-甘露糖苷酶活性与自由基、GHbA1C水平呈显著负相关。③ALP凝集素结合率：正常对照组、糖尿病组、糖尿病肝损害组血清ALP分子的L-PHA、WGA、LCA、PSA结合率均依次呈上升趋势,其中糖尿病肝损害组LCA、PSA结合率显著高于与正常对照组(P<0.01); L-PHA、WGA结合率三组间无统计学差异。相关性分析显示：血清ALP分子的LCA结合率与MDA、ONOO-、GHbA1C水平呈正相关；PSA结合率与ONOO、, NO3-、GHbA1C水平呈正相关；④糖尿病肝损害各证型间分析显示：痰瘀互结型、脾肾阳虚型血清MDA水平显著高于湿热内蕴型、肝郁脾虚型,气阴两虚型(P<0.01或0.05)；血清ONOO、, N03水平、α-甘露糖苷酶活性、GHbA1C各证型间经比较无统计学差异((P>0.05)；脾肾阳虚型血清ALP分子的LCA结合率与肝郁脾虚型、气阴两虚型比较有统计学差异(P<0.05)。各证型间血清ALP分子的L-PHA、WGA、PSA结合率均无统计学差异(P>0.05)。结论：①本研究显示,补中益气丸可以改善糖尿病大鼠肝组织病理学；降低自由基、升高α-甘露糖苷酶活性；其改善肝组织病理学机制之一可能是通过促进脾主运化的功能降低自由基水平,升高α-甘露糖苷酶活性而实现的。②本研究显示,糖尿病肝损害临床中医证型分布以气阴两虚型(32.14%)、痰蔚互结型(22.62%)、脾肾阳虚型(14.29%)为主。③本研究显示,随着疾病的进展,糖尿病肝损害患者血清ALP分子的糖链结构发生了变化：其ALP分子中C2C2二天线糖链结构及核心岩藻糖基化的高甘露糖型、杂合型糖链结构明显增多,末端甘露糖基和N-乙酰氨基葡萄糖基暴露增多；此种改变可能与自由基水平升高及血糖控制不良有关。④本研究提示,血糖控制不良,自由基升高、α-甘露糖苷酶活性下降,导致N-糖链缺陷而引发的内质网应激可能是糖尿病肝损害的发生机制之一。⑤本研究亦显示,糖尿病肝损害组不同中医证型间血清ALP糖链结构存在一定的差异,脾肾阳虚型ALP分子中核心岩藻糖基化的高甘露糖型、杂合型糖链结构较肝郁脾虚型、气阴两虚型增多。表明了证型相关的特异的糖链变化。