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研究目的检测NMDAR在胎鼠胰腺中的表达。观察宫内缺氧对母鼠摄食热卡,胎鼠存活率,体重,胎盘重量,胎盘重量/体重,胰腺重量,胰重/体重,胰岛β细胞的比例的影响,并通过观察NMDAR拮抗剂MK-801对宫内缺氧所致的胎鼠胰腺发育受阻的影响,推断NMDAR激活在此过程中所起的作用。方法1.使用Real-time PCR检测胎鼠胰腺中NMDAR的表达。2.观察MK-801对宫内缺氧所致胎鼠整体及胰腺发育受阻的影响:孕鼠实验分组:空气对照组,空气+MK-801组(0.05mg/kg,腹腔注射),缺氧组,缺氧+MK-801组(0.05mg/kg,腹腔注射),后三组又分为2天组,6天组和10天组,分别于孕第19天、孕第15天、孕第11天给予相应的处理。通过降低母鼠吸入氧浓度至10.5±1.0%,建立宫内缺氧的模型。于孕21天剖宫取胎,观察缺氧对母鼠摄食热卡、胎鼠存活率、出生体重、胎盘重量、胎盘重/体重、胰腺重量、胰腺重/体重、母鼠及胎鼠血糖、胎鼠血糖/母鼠血糖、胰腺和胰岛的形态、胰岛β细胞比例的影响,以及MK-801对缺氧所致胎鼠上述各项指标变化的影响。结果1.缺氧对胎鼠整体及胰腺发育的影响:(1)母鼠摄食热卡:各缺氧组母鼠摄食热卡均低于空气对照组(p＜0.01或p＜0.05)。(2)存活率:各缺氧组胎鼠的存活率均明显低于空气对照组(p＜0.01)。(3)体重,低出生体重鼠发生率:各缺氧组胎鼠的体重均明显低于空气对照组,且随缺氧天数的增加进行性下降(所有p＜0.01),低出生体重鼠发生率明显高于空气对照组(所有p＜0.01)。(4)胎盘重量,胎盘重/体重:各缺氧组胎盘重量均低于空气对照组(p＜0.01),胎盘重/体重比值随缺氧天数增加逐渐升高,缺氧6天组胎盘重/体重明显大于缺氧2天组(p＜0.05)而与空气对照组相比无统计学差异。缺氧10天组胎盘重/体重明显大于其它缺氧组和空气对照组(p＜0.01)。(5)胰腺重量,胰腺重/体重:各缺氧的胰腺重量随缺氧时间的延长进行性下降(p＜0.01),缺氧10天组胰腺重/体重明显低于空气对照组和其它缺氧组(p＜0.01)。(6)母鼠及胎鼠血糖,血糖比值:缺氧不影响母鼠血糖和胎鼠血糖值,但导致缺氧2天组胎鼠血糖/母鼠血糖升高(p＜0.05),缺氧6天组胎鼠血糖/母鼠血糖下降(p＜0.01)。(7)胰腺及胰岛形态学:缺氧2天组和6天组胎鼠单位面积胰腺内的胰岛数、胰岛面积/胰腺面积、单个胰岛内细胞数、单个胰岛直径和面积与空气对照组均无明显差异。但缺氧10天组的胰岛面积/胰腺面积、单个胰岛内细胞数、单个胰岛直径和面积较空气对照组明显下降(p＜0.01或p＜0.05),HE染色显示胰腺内外分泌部发育不成熟,未形成典型胰岛样结构。(8)胰岛中β细胞比例:各缺氧组的胰岛β细胞比例随缺氧天数的增加进行性下降(p＜0.01或p＜0.05)。2.NMDAR在胎鼠胰腺的表达:胎鼠胰腺中同时存在NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B、NMDAR2C、NMDAR2D mRNAs的表达,以NMDAR2D的表达量最高,NMDAR2A和NMDAR2C表达量其次,NMDAR1和NMDAR2B表达量最少。3.MK-801对宫内缺氧所致胎鼠整体及胰腺发育受阻的影响:(1)母鼠摄食热卡:缺氧+MK-801各组母鼠摄食热卡与缺氧组相比均无统计学差异,仍低于空气对照组(p＜0.01或p＜0.05)。各空气+MK-801组母鼠摄食热卡均明显低于空气对照组(p＜0.01或p＜0.05)。(2)存活率:缺氧+MK-801各组胎鼠的存活率均明显高于相应的缺氧组(p＜0.01或p＜0.05),与空气对照组相比无统计学差异。空气+MK-801各组的胎鼠存活率与空气对照组相比均无统计学差异。(3)体重,低出生体重鼠发生率:缺氧+MK-801 2天组胎鼠体重明显低于缺氧2天组(p＜0.01),低出生体重鼠发生率较缺氧2天组升高(p＜0.01)。缺氧+MK-801 6天组和10天组胎鼠体重均高于相应的缺氧组(p＜0.01),6天组的低出生体重鼠发生率低于于缺氧组(p＜0.05),缺氧+MK-801 10天组的低出生体重鼠发生率与缺氧10天组相比无统计学差异。空气+MK-801各组的体重均明显低于空气对照组(p＜0.01),低出生体重鼠发生率均明显高于空气对照组(p＜0.01),但各空气+MK-801组之间比较无统计学差异。(4)胎盘重量,胎盘重/体重:缺氧+MK-801 2天组和6天组的胎盘重量与相应的缺氧组相比无统计学差异,10天组胎盘重量明显高于缺氧10天组(p＜0.01)。缺氧+MK-801 2天组胎盘重/体重比值高于缺氧2天组(p＜0.05),缺氧+MK-801 6天组与缺氧6天组相比无统计学差异,缺氧+MK-80110天组胎盘重/体重比值明显低于缺氧10天组(p＜0.01),缺氧+MK-801各组与空气对照组相比均无统计学差异。各空气+MK-801组的胎盘重量均较空气对照组降低(p＜0.01或p＜0.05),胎盘重/体重与空气对照组相比无统计学差异,空气+MK-801 10天组的胎盘重/体重明显高于2天组和6天组(p均＜0.05)。(5)胰腺重量,胰腺重/体重:缺氧+MK-801 2天组胰腺重量明显低于缺氧2天组,缺氧+MK-801 6天组和10天组的胰腺重量均明显高于相应的缺氧组,但仍明显低于空气对照组(所有p＜0.01或p＜0.05)。缺氧+MK-801 2天组和6天组的胰腺重/体重的比值较空气对照组和相应缺氧组均无统计学差异,但缺氧+MK-801 10天组的胰腺重/体重明显高于缺氧10天组(p＜0.01)。各空气+MK-801组的胰腺重量均低于空气对照组(p＜0.01),仅空气+MK-801 6天组的胰腺重/体重明显低于空气对照组(p＜0.01),其余各组胰腺重/体重与空气对照组相比无统计学差异。(6)母鼠及胎鼠血糖,血糖比值:缺氧+MK-801 2天组胎鼠血糖/母鼠血糖的比值低于缺氧2天组(p＜0.05),缺氧+MK-801 6天组和10天组胎鼠血糖/母鼠血糖的比值较对应的缺氧组升高(p＜0.01)。缺氧+MK-801各组与胎鼠血糖/母鼠血糖的比值与空气对照组相比无统计学差异。缺氧+MK-801各组的母鼠血糖及胎鼠血糖与相应的缺氧组和空气对照组相比,无统计学差异。空气+MK-801各组的胎鼠及母鼠血糖均与空气对照组相比无统计学差异,空气+MK-801 6天组的胎鼠血糖/母鼠血糖高于空气对照组(p＜0.05)。(7)胰腺及胰岛形态学:缺氧+MK-801 2天组和6天组胎鼠单位面积胰腺内的胰岛数、胰岛面积/胰腺面积、单个胰岛内细胞数、单个胰岛直径和面积与相应的缺氧组和空气对照组相比,无统计学差异。缺氧+MK-801 10天组单位面积胰腺内胰岛数大于缺氧10天组(p＜0.05),胰岛面积/胰腺面积与缺氧10天组和空气对照组相比均无统计学差异,因缺氧10天组胰岛面积/胰腺面积低于空气对照组(p＜0.05),提示缺氧+MK-80110天组胰岛面积/胰腺面积高于缺氧10天组。HE染色显示缺氧+MK-801 10天组胰腺及胰岛的发育明显较缺氧10天组成熟。空气+MK-801各组与空气对照组相比,胰岛面积/胰腺面积、单个胰岛的直径和面积均小于空气对照组(p＜0.01或p＜0.05)。(8)胰岛中β细胞比例:缺氧+MK-801 2天组胰岛β细胞比例与缺氧2天组相比无统计学差异,仍明显低于空气对照组(p＜0.01)。缺氧+MK-801 6天组和10天组胰岛的β细胞比例均较相应的缺氧组明显升高(p＜0.01或p＜0.05),缺氧+MK-801 6天组与空气对照组相比无统计学差异,10天组仍明显低于空气对照组(p＜0.01)。空气+MK-801各组的胰岛中β细胞比例均明显低于空气对照组(p＜0.01或p＜0.05)。结论1.首次发现大鼠胎鼠胰腺中存在NMDAR的表达,以NMDAR2D表达量最高,NMDAR2A和NMADR2C表达量其次,NMDAR1和NMDAR2B表达量最低。2.成功制备宫内缺氧模型。3.MK-801可以明显改善长期慢性宫内缺氧胎鼠的整体和胰腺的发育受阻,NMDAR的过度激活在宫内缺氧所致胎鼠整体及胰腺发育受阻中起到重要作用。4.MK-801可以引起正常胎鼠的整体和胰腺胰岛发育受阻,提示NMDAR可能在胎鼠和胰腺胰岛的发育中起有重要作用。