本试验选取我国广东清远市的优质鸡品种-清远麻鸡和一个国外引进鸡品种-隐性白羽鸡作为研究对象,将CAPN1基因作为影响鸡肉嫩度性状的候选基因,采用PCR-SSCP和测序相结合的方法,在清远麻鸡和隐性白羽鸡群体中对CAPN1基因进行单核苷酸多态性(SNPs)扫描并分析其与肌肉嫩度等肉质性状之间的关系;同时利用SYBR Green I荧光定量PCR法检测了CAPN1基因在清远麻鸡和隐性白羽鸡胸肌和腓肠肌组织中的时空表达规律。试验结果如下:1. CAPN1基因多态性检测采用PCR-SSCP的方法对清远麻鸡和隐性白羽鸡CAPN1基因的编码区序列及3′调控区部分序列进行了SNPs检测。结果在3对引物的扩增序列中检测到了多态性,分别为外显子5中T2507C突变,C2546T突变,外显子6中G3535A突变以及3′调控区的G9950A突变,位于编码区的3个突变均没有引起相应氨基酸的改变,故均为沉默突变。统计了不同多态位点在不同品种中的基因型频率和基因频率,发现基因型分布在不同品种中存在差异。外显子5的多态位点在隐性白羽鸡中发现了A、B 2个等位基因和AA、AB、BB三种基因型, AA型为野生型,BB型在2546处存在C/T突变,其中B等位基因频率(0.752)明显高于A等位基因频率(0.248),在清远麻鸡中则发现了A、B、C 3个等位基因和AA、AB、BB、AC、BC、CC六种基因型,CC型个体同时存在T2507C突变和C2546T突变,其中C等位基因的频率为0.188;3′调控区的多态位点在两个鸡品种中均发现了G、A两个等位基因和GG、GA、AA三种基因型,在清远麻鸡群体中G等位基因的频率(0.675)高于A等位基因频率(0.325),在隐性白羽鸡群体中G等位基因的频率(0.484)则略低于A等位基因频率(0.516);外显子6在两个鸡品种中均发现了G、A两个等位基因和GG、GA、AA三种基因型,在清远麻鸡群体中G等位基因的频率(0.190)明显低于A等位基因频率(0.810),而在隐性白羽鸡中则完全相反,G等位基因的频率(0.840)明显高于A等位基因频率(0.160)。2. CAPN1基因各SNPs位点与肉质性状的关系不同品种、不同基因型的个体剪切力值最小二乘分析结果表明:在SNPC5位点上,存在显著的品种效应,在隐性白羽鸡中存在显著的基因型效应,AB型和BB型个体的剪切力值显著高于AA型(P<0.05),AB型个体剪切力值稍高于BB型个体,但两者之间的差异不显著;而清远麻鸡中基因型效应却不显著。在SNPC6位点上,存在显著的品种效应,在隐性白羽鸡中不存在显著的基因型效应;而在清远麻鸡中,GA型和AA型个体的剪切力值显著高于GG型(P<0.05)。在SNPC3的多态位点上,品种效应,基因型效应以及品种与基因型之间的互作效应均不显著。不同品种、不同基因型的个体系水力值最小二乘分析结果表明:在SNPC5位点上,存在显著的品种效应,在隐性白羽鸡中存在显著的基因型效应,AB型的系水力显著高于BB型(P<0.05)。在SNPC6和SNPC3位点上均不存在显著的品种效应、基因型效应以及品种与基因型之间的互作效应。(注:SNPC3、SNPC5、SNPC6分别代表CAPN1基因3′调控区、外显子5、外显子6的SNP位点,下面同。)3. CAPN1基因在鸡不同生长阶段表达规律研究在清远麻鸡和隐性白羽鸡的不同生长阶段(0,2,4,6,8,10,12周龄)胸肌和腓肠肌组织中均检测到了CAPN1基因的mRNA。在胸肌中,清远麻鸡CAPN1基因表达水平高于隐性白羽鸡,但两个鸡品种各时期发育性变化规律趋于一致,且表达高峰均出现在6周龄;而在腓肠肌中清远麻鸡2.5周龄以后的表达水平低于隐性白羽鸡,2.5周龄以前略低于隐性白羽鸡。两个鸡品种表达的变化趋势显示,以8周龄为分界线,8周龄以前两者的表达水平呈现相反的变化趋势,8周龄以后变化趋于一致,且清远麻鸡的表达高峰是在2周龄,而隐性白羽鸡的表达高峰出现在6周龄。同一鸡品种在不同组织的表达水平对比结果显示,两个鸡品种的对比结果类似,均为腓肠肌内的表达水平高于胸肌。从变化趋势来看,2周龄以前清远麻鸡在胸肌和腓肠肌内的变化趋势一致,2周龄以后的变化趋势则完全不一致,胸肌内的表达高峰期为6周龄,腓肠肌内为2周龄;隐性白羽鸡在胸肌和腓肠肌中的表达趋势为8周龄以前一致,8周龄以后不一致,表达高峰均出现在6周龄。