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RC是一种目前仅发现于硬骨鱼类中的细胞,自发现至今已有100多年的历史,目前,国外部分研究尤其是近期研究结果认为RC可能是一种与鱼类非特异性免疫反应有关的特殊细胞,但是关于其来源、功能性质以及属性和进化地位仍存在争议,其分子生物学研究资料几乎空白。本文以黄河鲤鱼为试验动物,主要内容如下:(1)利用光镜和电镜技术确立组织中RC的辨识标准,结果表明RC是一种具有明显形态特征的细胞,其细胞膜内侧皮层区形成了一层厚厚的纤维性壳(a thick fibrous capsule),胞质内存在一特殊的细胞器——杆状小体(rodlet),其外形呈现棒球杆状,每个杆状小体中心为电子密度高的杆状核心,核心外围为电子密度较低成分,整个杆状小体外有被膜,故杆状小体也被称为杆状小囊(rodlet sacs);其发育可分为三个阶段:未成熟阶段、成熟阶段和释放阶段,未成熟的杆状细胞,纤维囊较薄,棒状物内没有核心,成熟的杆状细胞有发育良好的纤维囊,许多带有致密中心的小杆以及一个位于基部较小的包含高电子致密沉积物的核,细胞的顶端聚集着许多的线粒体,液泡以及核糖体,释放阶段的细胞可以把小杆或者是小杆的核心释放出来。(2)用机械损伤的方法对黄河鲤造成应激胁迫,观察RC的组织分布以及变化趋势,分别在损伤后0h、0.5h、1h、2h、4h、6h、12h、24h、48h、72h、96h,取组织前肠、体肾、头肾、鳃、皮肤,应用常规解剖学和组织学方法对各组织中RC分布进行观察和数据统计,结果表明:前肠、体肾、头肾、和鳃中均可见有RC分布,皮肤中未观察到RC;统计学分析可见,与对照组相比,RC数目均呈现先上升后下降的趋势,在损伤1h内前肠内RC数目达到最高峰,细胞密度约为7.6431×10-5个/μm2,在体肾内RC数目在损伤2h后上升至最高点,细胞密度约为7.7652×10-5个/μm2,头肾组织内的RC在损伤4h后数目达到第一个高峰,细胞密度约为5.6819×10-5个/μm2,至12h时出现第二个高峰,细胞密度约为7.1549×10-5个/μm2。(3)用As2O3对黄河鲤暴露胁迫,观察RC组织内分布以及数目变化趋势,预试验设置10个浓度梯度组:0、10、20、30、40、50、60、70、80、90 mg/L,暴露96h后,测出三氧化二砷对黄河鲤的最高未死亡浓度为20mg/L,最低全死亡浓度70mg/L,根据改良寇氏法,设置0、20、25.7、33、42.4、54.5、70mg/L7个浓度梯度组暴露96h后,计算出As2O3对黄河鲤的LC50(96 h)和SC(96 h),并取组织:前肠、体肾、头肾、鳃、肝、皮肤,然后应用常规解剖学和组织学方法对各组织中RC分布进行观察和数据统计。结果表明:在温度25±0.5℃、PH值7.0±0.1时,As2O3对黄河鲤的LC50(96 h)为30.3 mg/L,SC(96 h)为3.03 mg/L,由此判定As2O3对黄河鲤为高毒物质;组织学观察显示RC在黄河鲤的前肠、体肾、头肾、鳃和肝组织中均有分布;据统计学分析,在急性暴露试验中,各组织RC数目变化趋势均为先随着浓度升高而升高,达到峰值后随着浓度升高而数目下降,不同组织中RC数目高峰均在96hLC50值左右,在前肠中分别在26mg/L和42mg/L时,RC数目达到高峰,细胞密度分别为4.9327×10-5个/μm2和5.2645×10-5个/μm2,在体肾和头肾中其峰值均在33mg/L,细胞密度分别为1.5046×10-4个/μm2和8.4176×10-5个/μm2;在亚急性暴露试验中,用SC(96 h)作为试验浓度,分别在0、6、12、24、48、96h和7d来取材,观察RC的数目变化趋势,各组织中RC数目变化都呈现先升高后下降的趋势,在前肠中,RC数目在96h时达到高峰,细胞密度约为6.8051×10-5个/μm2;而在体肾和头肾中,其数目高峰均出现在24h后,细胞密度分别为1.3819×10-4个/μm2和1.1152×10-4个/μm2。(4)用嗜水气单胞菌asjh16感染黄河鲤,预试验设置空白(0.7%生理盐水)、1×105、5×105、1×106、5×106、1×107、5×107、1×108 CFU/ml 8个浓度梯度处理组,感染96h后,统计死亡率,测出最高未死亡浓度为5×105 CFU/ml,最低全死亡浓度为1×108 CFU/ml;然后根据改良寇氏法,设置空白(0.7%生理盐水)、5×106、9.1×106、1.66×107、3.02×107、5.5×107、1×108CFU/ml7个浓度梯度组,感染96h,统计死亡率,计算出嗜水气单胞菌asjh16对黄河鲤的LC50(96 h)和SC(96 h)。结果显示:在温度25±0.5℃、PH值7.0±0.1时,嗜水气单胞菌asjh16对黄河鲤的LC50(96 h)为4.98×105 CFU/ml,SC(96 h)为4.98×104 CFU/ml。在亚急性毒性试验中,用安全浓度作为试验浓度,分别在0、6、12、24、48、96h、7d和15d来观察RC的组织分布及数目变化趋势,RC在黄河鲤的前肠、体肾、头肾、鳃和肝组织中均有分布。据统计学分析,各组织中RC数目变化都呈现升高后下降的趋势,在前肠和头肾中,RC数目都在12h后达到第一个峰值,细胞密度分别约为1.9238×10-4个/μm2和5.2008×10-5个/μm2,96h后达到第二个高峰,细胞密度分别约为2.887×10-4个/μm2和4.9102×10-5个/μm2,而在体肾中,RC的数目高峰是在24h后,细胞密度约为1.2532×10-4个/μm2。通过上述试验结果,本文可以得到以下结论:(1)通过对RC形态学的观察,确立了RC在组织中的辨识标准,判定其来源是黄河鲤内源性细胞;(2)三种试验结果表明,不同的应激胁迫因素都可以导致黄河鲤体内RC的增殖,由此也反证了RC具有抗应激胁迫的作用;(3)从三种试验结果比较筛选出RC数目最多的组织,是在感染嗜水气单胞菌96h后的黄河鲤前肠内,这为后期进行RC的分离、培养奠定了基础。