人类免疫缺陷病毒穿膜蛋白基因克隆、亚克隆及其重组杆状病毒斑鉴定

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人类免疫缺陷病毒(HIV)是艾滋病(AIDS)的致病因子,其穿膜蛋白gp41在病毒的感染与免疫中起着重要作用.该研究为国产HIV ELISA检测试剂盒 研制作出了有意义的尝试,为今后产品进一步推向市场产生巨大的社会、经济效益奠定了基础,首先运用PCR技术从含HIVⅢB株env基因全序列的克隆质粒上获得gp41基因,采用T/A克隆策略直接插入加T的克隆载体pGEM-5Zf(+)中,实现gp41基因的大量增殖及保存.经测序让实得到的基因与已知序徇同源性达99.7%.将gp41基因定向亚克隆入杆状病毒转移质粒中, 与线化的杆状病毒Bac-N-BlueDNA经脂质体介导法共转染昆虫细胞,通过胞内同源重组产生携带gp41基因的重组杆状病毒,进行X-gal的空斑测定时,重组病毒形成兰色空斑.该文的研究为进一步纯化、扩增重组病毒,实现重组gp41在昆虫细胞内的表达、分泌、提纯、抗原性鉴定以及最终应用于HIV ELISA检测,提供了前提条件.
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