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环境污染已对人类健康构成严重威胁,研究持久性有机污染物对人类健康与繁衍的不良影响已成为全球普遍关注的焦点。环境有害因素能够长期地、综合地作用于人体,干扰生殖发育的环节,危害生殖健康。已经证实多种化学物质的职业性或环境性接触会影响人类的生殖功能,使人类的生育能力发生显著改变,导致性欲低下或丧失、不良妊娠结局、不孕不育、后代畸形及肿瘤等[1]。甲氧滴滴涕(MXC)是人们主动投放到环境中数量最大、毒性最广的化学物质。近年来研究发现长期接触MXC可通影响各个环节导致生育能力下降[2,3]。HOXA-10基因属于腹部B组HOX基因,参与雌性生殖系统的发育,正常子宫内膜形态的构建,并对子宫内膜的增殖与分化、子宫内膜容受性的建立、胚胎的定位及黏附、胞饮突的形成、子宫内膜的蜕膜化以及血管通透性的增强发挥着重要作用[4]。目的:(1)研究MXC染毒对小鼠胚胎着床的影响。(2)研究MXC对胚胎着床中HOXA-10基因表达及蛋白表达的影响。(3)探讨MXC影响胚胎着床的分子机制。方法:(1)采用腹腔注射MXC染毒法,根据我科前期试验,将40只雌性性成熟昆明小鼠分为对照组(芝麻油组)、低剂量组(MXC 16mg/(kg·d)组)、中剂量组(MXC 32mg/(kg·d)组)、高剂量组(MXC 64mg/(kg·d)组)进行染毒,并在染毒过程中给予雌:雄2:1合笼处理,于孕5天处死小鼠,观察胚胎着床情况。(2)采用HE染色法对各组小鼠子宫形态进行比较。(3)采用实时定量荧光PCR法对各组小鼠子宫组织中的HOXA-10 mRNA进行检测。(4)采用免疫荧光及western blotting法对各组小鼠子宫组织中HOXA-10蛋白的表达进行检测。结果:(1)MXC染毒小鼠子宫形态及胚胎着床数明显下降。对照组胚胎着床数量大且分布均匀,染毒组胚胎着床分布不均,且着床数有不同程度的减少。其中,中、高剂量组与对照组相比差异明显(p<0.05),有统计学意义;低剂量组较对照组着床数有所减少,但没有统计学意义。低剂量组与中、高剂量组之间也有明显差异(p<0.05)。(2)MXC染毒对受孕小鼠子宫组织结构的HE染色可见:胚胎着床处子宫蜕膜、肌层厚度在染毒组及对照组未见明显异常。(3)MXC染毒对受孕小鼠HOXA-10蛋白表达的定性分析,免疫荧光显示,子宫蜕膜有绿色荧光,呈现阳性反应,平滑肌层未见明显阳性反应。虽各组均有显色,但对照组荧光明显亮于各染毒组。染毒组荧光强度随染毒剂量增加而减弱,但染毒组之间无明显统计学意义。(4)MXC染毒对受孕小鼠子宫组织中HOXA-10 mRNA表达的影响,实时定量荧光PCR明显的显示:中、高剂量组均显著降低HOXA-10 mRNA的表达水平,且有统计学意义(p<0.05),低剂量组与对照组相比,HOXA-10 mRNA的表达水平有所降低,但无统计学意义,中、高剂量组与低剂量组相比,HOXA-10 mRNA的表达水平明显降低,且有统计学意义(p<0.05)。(5)MXC染毒对受孕小鼠子宫组织中HOXA-10蛋白表达量的影响,western blotting结果表明:HOXA-10基因编码55KD及16KD两种蛋白。各剂量组两种蛋白表达量与HOXA-10 mRNA的表达相一致。但16KD蛋白的表达量低于55KD的蛋白。讨论:(1)MXC染毒后小鼠胚胎着床数减少,且中、高剂量组减少明显,有统计学意义。MXC表现出微弱的雌激素样作用,改变了子宫内环境,扰乱正常子宫容受性窗口期,从而干扰胚胎着床,使胚胎着床数下降。(2)MXC染毒后虽然影响胚胎着床,然而并不影响胚胎着床后着床处子宫的正常组织结构。根据所得H-E染色结果考虑MXC染毒对胚胎着床的影响主要是改变着床期子宫内环境,着床后对子宫组织的影响较小。(3)HOXA-10 mRNA在各剂量组受孕子宫中均有表达。随着MXC染毒剂量的增加,HOXA-10 mRNA的表达量降低。考虑MXC影响胚胎着床的机制是降低HOXA-10 mRNA的表达量从而影响着床期子宫内环境,使子宫容受性窗口期开放时间及持续时间与胚胎发育不同步,从而降低着床数。(4)HOXA-10蛋白在各剂量组受孕子宫的蜕膜组织中均有表达。MXC染毒可降低HOXA-10蛋白的表达但作用效果不全相同。HOXA-10基因编码55KD及16KD两种蛋白表达量的改变与HOXA-10 mRNA的改变相一致,考虑两种蛋白均与HOXA-10基因对胚胎着床的作用有关。而16KD蛋白的表达量小于55KD的蛋白,且受MXC的抑制作用更为明显。