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目的研究庆大霉素所致耳毒性损伤及应用抗氧化剂水杨酸钠保护时Ref-1和NF-κB在豚鼠耳蜗中的表达及其动态变化，探讨Ref-1和NF-κB在氨基苷类抗生素耳毒性机制中的作用。方法健康雄性白色红目豚鼠，随机分为7组，每组4只。Ⅰ组(对照组)：腹腔内注射生理盐水，连续7天；Ⅱ组(庆大霉素3日组)：腹腔内注射硫酸庆大霉素，连续3天；Ⅲ组(庆大霉素＋水杨酸钠3日组)：腹腔内注射硫酸庆大霉素和水杨酸钠，连续3天；Ⅳ组(庆大霉素7日组)：腹腔内注射硫酸庆大霉素，连续7天；Ⅴ组(庆大霉素＋水杨酸钠7日组)：腹腔内注射硫酸庆大霉素和水杨酸钠，连续7天；Ⅵ组(庆大霉素14日组)：腹腔内注射硫酸庆大霉素，连续14天；Ⅶ组(庆大霉素＋水杨酸钠14日组)：腹腔内注射硫酸庆大霉素和水杨酸钠，连续14天。分别于给药后不同时间点采集耳蜗标本，采用石蜡切片行Ref-1和NF-κB免疫组织化学染色，观察Ref-1和NF-κB在螺旋神经节细胞中的阳性染色情况，并且对每张切片在高倍镜下(×400)计数螺旋神经节区阳性染色的细胞数，每组耳蜗计数10个视野，结果用均数±标准差表示。结果对照组螺旋神经节细胞Ref-1和NF-κB呈弱阳性表达，主要表达于细胞浆；庆大霉素给药后及同时应用水杨酸钠后Ref-1和NF-κB在螺旋神经节细胞中染色数增加，尤其是胞核染色数明显增加。细胞计数定量观察表明，Ref-1胞核染色阳性细胞数在庆大霉素3日组、7日组、14日组分别为(5.20±1.21)、(25.20±1.23)和(14.80±0.79)个／400倍视野，庆大霉素＋水杨酸钠3日组、7日组和14日组分别为(9.20±1.23)、(29.40±1.49)和(16.60±1.07)个／400倍视野，各组与对照组(1.40±1.07)个／400倍视野相比均有统计学显著差异(P＜0.05)。NF-κB胞核染色阳性在庆大霉素3日组、7日组和14日组分别为(6.60±1.07)、(29.00±1.49)和(18.00±1.49)，庆大霉素＋水杨酸钠3日组、7日组和14日组分别为(10.00±1.49)、(34.60±1.96)和(21.00±1.49)个／400倍视野，以上各组与对照组(3.20±0.79)个／400倍视野相比较均有显著差异(P＜0.01)。结论Ref-1和NF-κB在正常豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞的胞浆中轻度表达。庆大霉素给药后早期耳蜗中Ref-1和NF-κB蛋白表达上调和核转移。同时给予抗氧化剂水杨酸钠可进一步促使Ref-1和NF-κB蛋白表达和核转移。在给药后7天Ref-1和NF-κB在螺旋神经节阳性细胞数达到最高，随着耳蜗损伤程度加重，给药后14天阳性细胞和核转移减少。上述结果提示在庆大霉素导致耳蜗损害的过程中Ref-1和NF-κB可能在机体的防护机制中起作用。