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由于碱性蛋白酶具有催化反应速度快,无工业污染,适应性宽等优点,被广泛地应用于医药、食品加工、化妆品、洗涤剂、丝纺、毛皮软化等行业。同时,经碱性蛋白酶水解、分离而来的酪蛋白磷酸肽,在食品、医药等行业也扮演着十分重要的作用。所以,为提高碱性蛋白酶的发酵活力,研究其在制备酪蛋白磷酸肽中的应用性能,本研究开展了以下工作:利用PCR技术获得了嗜碱芽胞杆菌B.licheniformis TCCC11006的碱性蛋白酶基因（apr）,并将该基因与表达载体pHY-WZX相连接,构建重组表达质粒pHY-WZX-apr。以蛋白酶基因缺失的B.licheniformB.H115作为宿主菌,成功构建了一株碱性蛋白酶基因工程菌。经SDS-PAGE检测,重组酶的分子质量为35 kDa左右。在基础发酵培养基中培养56h后,重组酶的最大酶活达到4910 U/mL,是出发菌株的2.79倍。将重组碱性蛋白酶进行初步纯化后,与市售的1398中性蛋白酶和2709碱性蛋白酶的酶学性质进行比较后,发现在较高的温度和pH环境下,重组碱性蛋白酶的稳定性较好;另外,Mn2+,Mg2+和Ca2+对其都有激活作用,只有少量的金属离子对其有抑制作用。通过正交实验确定了工程菌最佳产酶培养基组成为乳糖50 g/L,豆饼粉40 g/L,氯化铵3 g/L,磷酸盐15 mmol/L,氯化钙0.2 g/L;通过单因素实验确定摇瓶培养条件最佳组合为:种龄16 h,接种量为4%,34℃发酵培养56 h,发酵酶活达到6963 U/mL,是优化前的1.42倍。分别用三种蛋白酶水解酪蛋白溶液,并测定其水解度大小,发现利用重组碱性蛋白酶水解时,其水解度较高。通过单因素实验和正交实验,确定了最佳水解时间、水解温度、水解pH和酶的添加量分别为2 h、50℃、9.5和4000 U/g底物。在最优水解条件下,酪蛋白磷酸肽的得率和N/P摩尔比分别为14.8%和8.47,这为碱性蛋白酶在功能性食品制造方面的应用奠定了良好的基础。