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二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA),属于n-3系列多不饱和脂肪酸,对人体的生长发育和健康等方面有重要作用。目前EPA主要来源于深海鱼油,但由于鱼油资源的日渐匮乏、环境污染日益加剧等因素,使得EPA的来源十分有限,因此利用微生物发酵生产EPA成为研究的热点。本研究以实验室保藏的高山被孢霉突变Mortierella alpina 200012201-12-2-2(以下简称12-2-2)为出发菌,首先对其变温诱导产EPA进行研究,进而对其产EPA的最佳培养基成分和条件进行优化,最后对其补料方式进行了探索,获得结果如下:1、研究了温度对高山被孢霉突变株12-2-2生长代谢,油脂积累及EPA、ARA合成的影响。在此基础上,设计了四种不同的变温调控方式,最终确定最佳变温为:菌种在28℃培养2 d后,将温度降到20℃培养3 d,最后将温度降到12℃培养7 d,高山被孢霉突变株油脂产量可达到8.62 g/L,EPA产量可达158.39 mg/L,是恒温培养条件下EPA最高含量的2.68倍。同时,采用这种变温方式,可以使ARA的产量达到2.67 g/L。2、通过单因素实验找出影响EPA的最佳碳源、氮源等营养成分,再通过Plackett-Burman实验找出影响EPA产量的显著性因素,最后通过响应面优化实验得出最佳培养基成分为:葡萄糖的添加量为89.64 g/L,酵母膏为12.71 g/L,前体物质的添加量为2.01%及其他成分,在此条件下得到EPA的产量为200.82 mg/L,比优化前提高了27.09%。3、设计单因素实验,对菌株产EPA的各影响条件进行优化,并对较明显的三个因素进行响应面优化,结果显示最佳培养条件为:接种量11%,初始p H6.5,培养时间12 d,EPA最大产量为255.9 mg/L,比优化前的EPA产量(202.142)提高了26.59%。4、探讨了摇瓶发酵中高山被孢霉突变株12-2-2一次性补料工艺和残糖反馈补料工艺,结果显示:一次性补料工艺的最佳补糖时间在第3 d,补糖的最佳浓度为40 g/L;而残糖反馈补料工艺则分别在第2 d和第4 d共补糖两次,补糖的浓度为20 g/L。相对于不补糖,一次性补料和残糖反馈补料两种补糖方式生物量稍有提高,而EPA、油脂产量显著提高,分别提高了10.57%和35.08%;而相对与一次性补料的补糖方式,残糖反馈补料的补糖方式发酵周期缩短1d。