论文部分内容阅读
目的:通过原代培养大鼠骨髓源内皮祖细胞(Endothelial Progenitor Cells,EPCs),血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)诱导EPCs衰老,研究血府逐瘀汤对大鼠骨髓源EPCs的衰老、迁移及miR-34a、p53、SIRT1表达的影响,探讨血府逐瘀汤抗大鼠骨髓源EPCs衰老的作用及机理,为血府逐瘀汤的临床应用提供科学依据。方法:原代培养大鼠骨髓源EPCs,AngⅡ诱导EPCs衰老,随机分成正常组、模型组、miR-34a抑制剂组、5%血府逐瘀汤含药血清组(以下简称5%含药血清组)、10%血府逐瘀汤含药血清组(以下简称10%含药血清组)、15%血府逐瘀汤含药血清组(以下简称15%含药血清组),细胞衰老试剂盒检测EPCs衰老,Transwell小室检测EPCs迁移功能,qRT-PCR检测EPCs中miR-34a,p53 mRNA,SIRT1mRNA的表达量,western blot检测EPCs中p53蛋白,SIRT1蛋白的表达量。结果:1.对EPCs衰老的影响:与正常组比较,模型组中的EPCs衰老数量明显增多(p<0.01);与模型组比较,miR-34a抑制剂组和5%、10%、15%含药血清组的EPCs衰老数量显著减少(p<0.01);与miR-34a抑制剂组比较,5%、10%、15%含药血清组中的EPCs衰老数量显著增多(p<0.01);与5%含药血清组比较,10%、15%含药血清组的EPCs衰老数量明显减少(p<0.01);与10%含药血清组比较,15%含药血清组的EPCs衰老数量明显减少(p<0.01)。3个浓度中以15%含药血清组延缓EPCs衰老作用最佳,在不同的干预时间差异无统计学意义(p>0.05)。2.对EPCs迁移功能的影响:与正常组比较,模型组EPCs的迁移数量显著减少(p<0.01);与模型组比较,miR-34a抑制剂组和5%、10%、15%含药血清组EPCs的迁移数量明显增多(p<0.01);与miR-34a抑制剂组比较,5%、10%、15%含药血清组EPCs的迁移数量明显减少(p<0.01);与5%含药血清组比较,10%、15%含药血清组EPCs的迁移数量明显增多(p<0.01);与10%含药血清组比较,15%含药血清组EPCs的迁移数量显著增多(p<0.01)。3个浓度中,15%含药血清组效果最佳。3.对miR-34a的影响:与正常组比较,模型组中miR-34a表达量明显升高(p<0.01);与模型组比较,miR-34a抑制剂组和10%、15%含药血清组中miR-34a的表达量显著降低(p<0.01),5%含药血清组miR-34a表达差异无统计学意义(p>0.05);与miR-34a抑制剂组比较,5%、10%、15%含药血清组中miR-34a表达量明显升高(p<0.01);与5%含药血清组比较,10%、15%含药血清组miR-34a表达量明显降低(p<0.01);与10%含药血清组比较,15%含药血清组miR-34a表达无统计学意义(p>0.05);3个浓度中以15%含药血清效果最佳,在不同的干预时间点上无显著差异(p>0.05)。4.对p53的影响:与正常组比较,模型组中p53 mRNA及p53蛋白表达量明显升高(p<0.01);与模型组比较,miR-34a抑制剂组和10%、15%含药血清组中p53 mRNA及p53蛋白的表达量显著降低(p<0.01),5%含药血清组p53mRNA及p53蛋白的表达量与模型组比较差异不明显(p>0.05);与miR-34a抑制剂组比较,5%、10%、15%含药血清组p53 mRNA及p53蛋白的表达量均明显升高(p<0.01);与5%含药血清组比较,10%、15%含药血清组p53 mRNA及p53蛋白的表达量显著降低(p<0.01),与10%含药血清组比较,15%含药血清组p53mRNA及p53蛋白的表达量差异不明显(p>0.05);3个浓度中以15%含药血清效果最佳,在不同的干预时间点上无显著差异(p>0.05)。5.对SIRT1的影响:与正常组比较,模型组中SIRT1 mRNA及SIRT1蛋白表达量明显降低(p<0.01);与模型组比较,miR-34a抑制剂组和10%、15%含药血清组SIRT1 mRNA及SIRT1蛋白的表达量上调(p<0.01),5%含药血清组及SIRT1蛋白表达差异无统计学意义(p>0.05);与miR-34a抑制剂组比较,5%、10%、15%含药血清组SIRT1 mRNA及SIRT1蛋白的表达量明显下调(p<0.01);与5%含药血清组比较,10%、15%含药血清组SIRT1 mRNA及SIRT1蛋白的表达量有显著升高(p<0.01);与10%含药血清组比较,15%含药血清组SIRT1 mRNA及SIRT1蛋白表达量明显升高(p<0.01);3个浓度中以15%含药血清效果最佳,其中SIRT1 mRNA的表达在不同的干预时间点上无显著差异(p>0.05),SIRT1蛋白在干预48 h效果最佳。结论:1.血府逐瘀汤可以延缓内皮祖细胞衰老,增强内皮祖细胞的迁移能力。2.血府逐瘀汤可以抑制衰老EPCs中miR-34a的表达,其中以15%含药血清组效果最佳。3.血府逐瘀汤可以下调衰老EPCs中p53的表达,其中以15%含药血清组效果最佳。4.血府逐瘀汤可以上调衰老EPCs中SIRT1的表达,其中以15%含药血清组效果最佳。