局部浸润和远处转移是恶性肿瘤(malignant tumor)最重要的生物学特征，也是恶性肿瘤导致患者死亡的主要原因。如果没有足够的血供和营养，肿瘤细胞就无法生长和转移，因此，新生血管的生成在恶性肿瘤浸润转移过程中起重要作用。新生血管不仅可以为肿瘤细胞的生长提供营养，还为肿瘤的远处转移和浸润提供条件。随着社会和经济的发展，肿瘤已成为全人类共同关心的重大课题，肿瘤新生血管也成为科研重点之一，国内外的科学家们都期望通过对新生血管的研究来达到预防和控制恶性肿瘤的目的。　　 新生血管形成常见于炎症、肿瘤、缺血和创伤愈合等病理过程，肿瘤的新生血管形成是一个多种细胞及因子参与的复杂的病理过程，其确切机制尚未完全清楚。CY15是起源于树突状细胞(dendritic cell，DC)的BALB/c小鼠恶性组织细胞增生症细胞系3，将编码绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)的逆转录病毒转染入CY15细胞，经过筛选得到能稳定表达绿色荧光蛋白的CY15-GFP细胞，可以直接在荧光显微镜下观察细胞形态83。本实验将CY15-GFP瘤细胞植入SD大鼠(Sprague Dawley大鼠)角膜基质层囊袋内，观察CY15-GFP瘤细胞诱导新生血管生成的过程，探讨肿瘤新生血管生成的相关机制。　　 一、研究目的　　 建立CY15-GFP瘤细胞诱导新生血管生成的动物实验模型。探讨肿瘤新生血管生成的发生机制，为肿瘤的治疗提供新的途径。　　 二、研究方法　　 1.制作SD大鼠右眼颞侧角膜基质层囊袋，实验组(CY15-GFP组)和实验对照组(死细胞组)分别用微量注射器在囊袋内接种1微升(1x104个)CY15-GFP细胞和福尔马林固定后的CY15-GFP细胞，空白对照组(PBS组)注入同体积PBS。　　 2.术后每天裂隙灯观察术眼并照相。待实验组角膜基质层新生血管长至囊袋周围后行墨汁心脏灌注，角膜新生血管显影，取角膜制作铺平片并摄像，HE染色进行常规组织学观察。术后第1、3、7、10、14天进行荧光显微镜活体观察实验组角膜荧光细胞并摄像。　　 3.RT-PCR检测CY15-GFP瘤细胞体外表达VEGF、MMP9 mRNA的情况。RT-PCR检测术后第7天CY15-GFP组和PBS组角膜组织中VEGF、MMP9的mRNA表达情况，免疫组织化学染色检测角膜组织中VEGF、MMP9蛋白表达情况。RT-PCR检测术后第14天CY15-GFP组角膜组织中VEGF、MMP9的mRNA表达情况。　　 三、实验结果　　 1.CY15-GFP组术后第1天可见角膜轻度水肿，颞侧角巩缘血管网扩张，随后新生血管芽长出；术后第3天，颞侧角膜水肿加重，新生血管向囊袋方向生长；术后第7天，新生血管长至囊袋周围，随后角膜水肿不断减轻，新生血管变稀疏变短；术后第10天角膜轻度水肿，新生血管较消退明显；术后第14天时新生血管完全消失，角膜恢复透明。PBS组和死细胞组术后第1天颞侧角巩缘血管网充血，术后第2天充血减轻，观察过程中未见新生血管长出。　　 2.术后第7天CY15-GFP组角膜组织组织学检查见囊袋内肿瘤细胞及新生血管断面，囊袋周围淋巴细胞聚集。墨汁灌注显示新生血管位于CY15-GFP组角膜。荧光显微镜观察显示囊袋内荧光细胞在14天时已全部消失。　　 3.CY15-GFP瘤细胞体外表达VEGF、MMP9mRNA。术后第7天，CY15-GFP组角膜VEGF、MMP9mRNA表达均较PBS组明显增高，差异有统计学意义(P均＜0.05)。术后第7天VEGF、MMP9蛋白主要表达于CY15-GFP组角膜基质层内肿瘤细胞及新生血管内皮细胞，对照组基质层未见表达。术后第14天，CY15-GFP组角膜VEGF、MMP9mRNA表达均较术后第7天弱，差异有统计学意义(P均＜0.05)。　　 四、结论　　 1.CY15-GFP瘤细胞植入SD大鼠角膜基质层囊袋能诱导新生血管生成。　　 2.CY15-GFP瘤细胞诱导新生血管形成的机制，与局部MMP9、VEGF的mRNA及蛋白表达增高有关，提示MMP9和VEGF可作为肿瘤新生血管治疗的靶向因子。