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面神经损伤是口腔颌面外科临床上一种常见且较为严重的创伤并发症之一,常伴随腮腺区域的外伤及手术相关创伤,进而导致面神经麻痹。继发于面神经损伤后引起的周围性面神经麻痹,是一种既影响患者面部运动功能（鼓腮无力,眼睑不能闭合等）又影响美观（口角歪斜,鼻唇沟消失等）的严重疾病,会给患者及家人带来了社交、审美等心理、精神障碍。近年来,随着组织工程和再生医学（Tissue engineering and regenerative medicine,TE/RM）飞速发展,针对长间断面神经缺损的问题研究出一系列组织工程神经移植物（Tissue engineered nerve grafts,TENGs）,其包含神经导管支架、支持细胞（种子细胞）、神经营养因子、细胞外基质以及细胞粘附分子等成分,通过模拟自体神经移植物的结构及生物学特点,建立理想的再生微环境以更好地促进再生神经轴突由近端向远端生长并再支配靶器官。临床上,脂肪组织可以通过反复使用安全、微创的吸脂术获得,因此其成为理想的种子细胞来源。成熟脂肪细胞是脂肪组织中最丰富的细胞类型,其占脂肪组织的90%以上。从脂肪组织中分离出的成熟脂肪细胞可以通过体外去分化（天花板培养）为成纤维细胞样细胞,称为去分化脂肪细胞（Dedifferentiated fat cells,DFAT cells）。与传统脂肪组织来源干细胞——脂源性干细胞（Adipose-derived stem cells,ASCs）相比,DFAT细胞体现出相同的增殖活性以及多向分化的能力。DFAT细胞与ASCs虽然同样来自于脂肪组织,但两者来源的细胞群体不同,DFAT细胞来源于成熟的脂肪细胞,而ASCs来源于脂肪组织中基质-血管部分（Stromal-vascular fraction,SVF）,而SVF是由一组异质性的细胞群组成的,内含内皮细胞、非特征性的基质细胞、血液细胞和组织型巨噬细胞等。通过两者来源我们可以推测DFAT细胞具有较高的同质性（Homogeneity）,纯度远高于ASCs,并且来源于占脂肪组织90%以上的成熟脂肪细胞的它来说,初期即可获得大量的细胞基数,为快速进行面神经缺损修复提供可能。目的:本研究拟通过体外细胞因子诱导,将DFAT细胞在体外定向诱导为类雪旺细胞样细胞,称为定向诱导分化的去分化脂肪细胞（Direction-induced dedifferentiated fat cells,d-DFAT cells）,并进一步探讨其对促进面神经再生的作用。利用d-DFAT细胞并复合I型胶原凝胶与硅胶导管构建一种新型组织工程神经并评价其修复面神经缺损的效果。方法:1.分离DFAT细胞（天花板培养法）及ASCs（差速离心法）原代细胞,并进行培养传代。然后通过流式细胞表面抗原的鉴定、三系诱导分化以及细胞形态这3种方式观察DFAT细胞是否与ASCs一样具有“干细胞特性”。2.将第2代DFAT细胞及ASCs应用细胞因子进行体外诱导分化,通过鉴定SCs的细胞表面标志物神经组织蛋白S-100β（Nerve tissue protein S-100β,S-100β）及胶质纤维酸性蛋白（Glial fibrillary acidic protein,GFAP）来判断其是否具有向SCs分化的能力。3.将种子细胞（d-DFAT细胞、d-ASCs、DFAT细胞及ASCs）与Ⅰ型胶原蛋白混合后,与硅胶导管共培养形成TENGs。将其植入到SD大鼠面神经缺损模型中通过比较各组大鼠触须运动功能、再生面神经颊支神经电生理评估及再生面神经颊支形态学及组织学的情况,判断各组对SD大鼠面神经颊支缺损的再生能力。4.利用d-DFAT细胞构建3D细胞聚合体,并其进行组织学评估。结果:1.DFAT细胞与ASCs细胞形态成梭形的类成纤维细胞样;能够进行成骨及成脂诱导分化;流式细胞表面抗原鉴定显示CD44与CD90表达阳性而CD45表达阴性。2.DFAT细胞在神经诱导培养基作用下发生分化,形态上逐渐由梭形、扁平状多突起星状成纤维细胞样细胞,转变为纺锤形、细胞双极呈拉丝状延伸的SCs形态;免疫细胞化学（ICC）鉴定证实d-DFAT细胞与d-ASCs一样,均表达SCs表面标志物S-100β和GFAP。3.通过对SD大鼠触须运动的观察、神经电生理的检测以及组织学结构（髓鞘、轴突及胶质细胞）的评估,可知类雪旺样细胞组（d-DFAT细胞组与d-ASCs组）面神经功能及结构恢复的速度及程度均要优于干细胞组（DFAT细胞组与ASCs组）,但整体情况要略逊于自体神经组（Autograft组）。4.d-DFAT细胞培养形成3D d-DFAT细胞聚合体,并通过组织学评估我们可以发现,3D d-DFAT细胞聚合体由大量细胞组成,且细胞之间密度较高、排列较为均匀内含有大量的胶原纤维及I型胶原蛋白,细胞之间存在大量细胞外基质。结论:1.DFAT细胞与ASCs一样具有“干细胞特性”。2.DFAT细胞与ASCs一样能够向类雪旺细胞进行分化。3.建立了SD大鼠面神经颊支10mm缺损的模型;利用含种子细胞（d-DFAT细胞、d-ASCs、DFAT细胞及ASCs）的TENGs对大鼠面神经颊支缺损进行修复,通过大鼠触须运动、神经电生理及再生面神经颊支形态学及组织学的评价,发现d-DFAT细胞作为种子细胞与d-ASCs一样均能够很好的引导和支持轴突再生,并促进髓鞘的形成;与单纯的干细胞作为种子细胞（DFAT细胞、ASCs）进行比较,d-DFAT细胞在面神经颊支缺损修复的过程中具有显著的优势;但与自体神经移植相比下仍然有不足。4.成功构建3D d-DFAT细胞聚合体,通过对其进行组织学评估,发现其内细胞排列均匀且富含胶原纤维及I型胶原蛋白,细胞之间存在大量细胞外基质。