论文部分内容阅读
[目的] 本研究组前期实验已经证实,PM2.5毒染小鼠后可导致肺泡Ⅱ上皮细胞损伤,板层小体数量增多,排空增强,从而SP-A分泌增加,但PM2.5诱发引起SP-A蛋白分泌细胞信号通路仍未完全明确。因此,本文通过体外研究,探讨PM2.5如何通过IL-1α、NF-κB介导SP-A mRNA表达来调节SP-A分泌。 [方法] 建立PM2.5毒染A549细胞模型,实验分组:A(对照组)、B(PM2.5毒染组)、C(IL-1α组)、D(IL-1Ra组)、E(IL-1Ra处理PM2.5毒染组)、F(IL-1α处理PM2.5毒染组)、G(IL-1α处理IL-1Ra与PM2.5共培养组)。各组A549细胞分别经过500ul PM2.5(200ug/ml)、IL-1α1μl(0.1 mg/ml)和IL-1Ra1μl(0.1 mg/ml)处理24小时,收集细胞(D、E、G组为抑制组)。首先采用RT-PCR检测各组SP-A mRNA表达情况,再用Western-blot检测各组SP-A及NF-κB表达情况,最后采用ELISA检测A组、B组、D组、E组细胞培养基中IL-1α水平。 [结果] 1.PM2.5对SP-A mRNA表达的影响 B组、C组、D组、E组、F组、G组SP-AmRNA表达差异有统计学意义(P<0.05)。其中D组表达量最低,F组表达量最高;E组比G组表达量亦相对较低,两组皆比F组表达较低;这说明PM2.5、IL-1α两者都有促进SP-A mRNA表达的作用,而且可被IL-1Ra抑制;同时两者共培养组表达量最高,可能存在互相促进作用。 2.PM2.5对A549细胞SP-A表达的影响 B组、C组、D组、E组、F组、G组分别与A组比较,SP-A蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05)。B组、C、E组、F组、G组的SP-A蛋白表达较A组增加,而D组较之较少。E组SP-A蛋白表达较D组增加而相对于F组和G组增加程度较少,另外F组相对表达量最高。结果提示,IL-1α与PM2.5分别可上调SP-A分泌,并且两者共同处理A549细胞比单独处理时上调作用增强,而IL-1Ra抑制前面两者作用,单独使用IL-1 Ra时抑制SP-A分泌的作用明显;SP-A蛋白变化基本与SP-AmRNA表现基本相符。 3.PM2.5对A549细胞NF-κBp65表达的影响 B组、C组、D组、E组、F组、G组分别与A组比较,NF-κ Bp65蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05);B组、C组、E组、F组、G组的NF-κBp65蛋白表达增强,而D组表达明显减弱,E组NF-κ Bp65蛋白表达较D组增加而相对于F组和G组增加程度较小。结果提示IL-1Ra因子可明显降低NF-κB蛋白的表达。另外PM2.5、IL-1α都可提高NF-κB蛋白表达,IL-1α联合PM2.5对NF-κB蛋白的表达提高程度相对于单独作用更高,可能原因是PM2.5可促进IL-1α分泌的作用;总之,各组NF-κB表达变化与SP-A及其mRNA变化情况一致。 3.ELISA检测细胞上清IL-1α结果 A组与B组、D组、E组对比,IL-1α生成相对较少,差异明显。B组生成表达IL-1α最高,E组相对较少,但仍较D组增高明显。D组的IL-1α生成仍较A组增高,提示可能存在负反馈作用。 [结论] PM2.5通过IL-1α/NF-κB通路介导A549细胞SP-A的分泌。