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目的:研究慢性肾衰竭(chronic renal failure,CRF)湿热证患者服用清肾颗粒前后外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)信号通路及p-JNK和细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK1/2)信号通路及p-ERK1/2的蛋白表达情况;并探讨清肾颗粒能否通过干预慢性肾脏病(Chronic kidney disease,CKD)患者PBMC中JNK信号通路及ERK1/2信号通路的活化而达到抑制肾脏纤维化,从而延缓疾病的发展进程。方法:依据纳入标准和随机数字表,将70名CRF湿热证患者分为治疗组与对照组各35例,同时设正常组30名检测PBMC中JNK、p-JNK和ERK1/2、p-ERK1/2的蛋白表达情况。研究最终完成64例(治疗组、对照组均为32例)。两组受试者均采用西医基础治疗、中药保留灌肠,其中治疗组加服清肾颗粒(30g/日,均分为3次,连续服用12周)。观察两组患者治疗前后PBMC中JNK及p-JNK、ERK1/2及p-ERK1/2的蛋白表达情况,中医证候积分值,血肌酐(serumcreatinine,Scr)并计算肾小球滤过率(estimated glomerular filtration rate,eGFR),同时对比两组患者的临床疗效、中医证候疗效。结果:1.Scr:治疗前两组差异不明显(P>0.05);12周后,治疗组Scr比治疗前显著下降(P<0.01),和对照组相比也显著降低(P<0.01);对照组治疗前后无明显变化(P>0.05)。2.eGFR:治疗前两组无明显差异(P>0.05);12周后,治疗组eGFR较治疗前显著升高(P<0.01),和对照组相比也上升显著(P<0.01);对照组患者治疗前后差异较小(P>0.05)。3.临床疗效:治疗组总有效率(81.25%)与对照组(53.13%)相比明显升高(P<0.05)。4.中医证候疗效:治疗组总有效率(84.38%)与对照组(56.25%)相比明显升高(P<0.05)。5.中医证候积分:治疗前两组无明显差异(P>0.05);12周后,治疗组效果显著(P<0.01),同时对照组疗效明显(P<0.05),且治疗组积分高于对照组(P<0.01)。6.P-JNK、P-ERK1/2蛋白表达:治疗前两组差异不明显(P>0.05),治疗12周后,两组患者与治疗前相比都下降明显(P<0.01);且治疗组治疗后比同期对照组显著下降(P<0.01);7.JNK、ERK1/2蛋白表达:治疗前两组相比差异较小(P>0.05),治疗12周后,两组患者与治疗前对比都下降明显(P<0.01);但两组治疗后对比差异不明显(P>0.05);8.安全性指标显示:12周后,检测治疗组血常规、尿常规、粪常规、ALT与AST及心电图等和治疗前对比都无异常改变。结论:1.CRF患者PBMC中JNK、p-JNK、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达水平均较正常组升高;2.清肾颗粒可改善CRF湿热证患者临床症状及肾功能;3.清肾颗粒可使CRF患者PBMC中JNK及p-JNK、ERK1/2及p-ERK1/2蛋白表达水平下降;4.治疗后检测各安全性指标较治疗前均无异常改变,且患者服用清肾颗粒后无药物不良反应事件发生。目的:通过检测清肾颗粒各剂量组在肾纤维化大鼠肾脏组织中c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)信号通路及p-JNK、细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK1/2)信号通路及p-ERK1/2的蛋白表达情况;研究清肾颗粒能否能通过干预ERK1/2、JNK两条信号通路的活化,达到抗肾纤维化(renal fibrosis,RF)的作用。方法:选用雄性SD大鼠72只,采用随机抽样方法,平均分配到正常组、模型组、氯沙坦组与清肾颗粒高、中、低剂量组。除正常组外,其他组皆依据标准实验方法制成5/6肾切除模型。正常组、模型组皆予以标准动物饲料与干净水;氯沙坦组用氯沙坦钾片混悬液灌胃;其余3组依次予以相应剂量清肾颗粒水溶液灌胃。观察12周后,测定各组大鼠的血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(Serum Creatinine,Scr)、内生肌酐清除率(Creatinine Clearance,Ccr)、24小时尿蛋白定量(24-hour urinary protein quantification,24h Upro)与尿肌酐(urine creatinine,Ucr);Western blot法测定肾脏组织内JNK、p-JNK及ERK1/2、p-ERK1/2的蛋白表达;免疫荧光检测肾脏组织中血小板-内皮细胞粘附分子(Platelet endothelial cell adhesion molecule-1,PECAM-1/CD31)与p-JNK及p-ERK1/2,然后用激光共聚焦显微镜扫描成像;HE、masson与PAS染色观察6组SD大鼠肾脏组织病理改变。结果:1.BUN、Scr:模型组较正常组显著升高(P<0.01);与模型组相比,清肾颗粒各剂量组、氯沙坦组BUN、Scr显著降低(P<0.01);清肾颗粒高、中、低剂量组区别明显(P<0.01),其中高剂量组最低;清肾颗粒高剂量较氯沙坦组显著下降(P<0.01);清肾颗粒中、低剂量组与氯沙坦组比较无明显差异(P>0.05)。2.24h Upro:模型组较正常组显著上升(P<0.01);与模型组比较,其他各组大鼠24h Upro显著下降(P<0.01);清肾颗粒不同剂量组相比明显不同(P<0.01),其中高剂量组最低;清肾颗粒高剂量组较氯沙坦组下降明显(P<0.01);清肾颗粒中、低剂量组与氯沙坦组比较无明显差异(P>0.05)。3.Ccr:模型组比正常组显著下降(P<0.01);与模型组相比,清肾颗粒各剂量组、氯沙坦组Ccr显著上升(P<0.01);清肾颗粒高、中、低剂量组相比有所不同(P<0.01),其中高剂量组最高;清肾颗粒高剂量组比氯沙坦组明显升高(P<0.01);清肾颗粒中、低剂量组与氯沙坦组比较无明显差异(P>0.05)。4.ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达情况(Western blot法):⑴ERK1/2:模型组ERK1/2蛋白表达量比正常组明显升高(P<0.05);与模型组比较,清肾颗粒各剂量组、氯沙坦组ERK1/2蛋白表达量下降显著(P<0.01);清肾颗粒各剂量组之间对比无明显差异(P>0.05);清肾颗粒各剂量组与氯沙坦组比较无明显差异(P>0.05)。⑵p-ERK1/2:模型组p-ERK1/2蛋白表达量较正常组明显升高(P<0.01);与模型组比较,清肾颗粒各剂量组、氯沙坦组p-ERK1/2蛋白表达量降低明显(P<0.01);清肾颗粒高、中、低剂量组之间p-ERK1/2蛋白表达量对比有差异(P<0.01),其中高剂量组最低;与氯沙坦组对比,清肾颗粒中、低剂量组显著升高(P<0.01);清肾颗粒高剂量组p-ERK1/2蛋白表达量与氯沙坦组相比无统计学差异(P>0.05)。5.JNK、p-JNK蛋白表达情况(Western blot法):⑴JNK:模型组JNK蛋白表达量比正常组升高(P<0.05);与模型组相比,清肾颗粒各剂量组、氯沙坦组JNK蛋白表达量显著降低(P<0.01);清肾颗粒高、中、低剂量组之间JNK蛋白表达量相比差异不明显(P>0.05);清肾颗粒各剂量组与氯沙坦组比较无明显差异(P>0.05)。⑵p-JNK:模型组p-JNK蛋白表达量较正常组上升(P<0.05);与模型组比较,清肾颗粒各剂量组及氯沙坦组p-JNK蛋白表达量显著降低(P<0.01);清肾颗粒高、中、低剂量组之间p-JNK蛋白表达对比差别有统计学意义(P<0.05),其中高剂量组最低;与氯沙坦组对比,清肾颗粒高、中剂量组p-JNK蛋白表达量显著降低(P<0.01),而清肾颗粒低剂量组显著升高(P<0.01)。6.免疫荧光双染检测CD31与p-ERK1/2、CD31与p-JNK蛋白表达情况(激光共聚焦显微镜扫描成像):⑴CD31+p-ERK1/2:p-ERK1/2在正常组中没有表达;模型组中两者均有明显表达;清肾颗粒各剂量组及氯沙坦组较模型组表达有不同程度下降,其中高剂量组表达最少;⑵CD31+p-JNK1/2:p-JNK在正常组中没有表达;模型组两者均有明显表达;清肾颗粒各剂量组及氯沙坦组较模型组表达有不同程度下降,其中高剂量组表达最少;7.各组大鼠肾脏病理形态学变化:正常组大鼠肾脏病理结构无异常改变;模型组大鼠显示肾小管上皮细胞脱落、出现空泡变性,部分管腔扩张,众多炎性细胞浸润肾间质,蓝染胶原纤维大量堆积,肾间质损伤指数显著上升,肾小球大小形态不一,可见系膜细胞增生、基质增多,部分可见局灶性肾小球硬化。与模型组比较,高剂量组病理损伤最轻,其他各组均较高剂量组病理损伤重。结论:1.JNK及ERK1/2信号通路的活化参与RF的形成过程,特别是p-JNK和p-ERK1/2在RF病程中起主要作用;2.清肾颗粒能够降低肾纤维化大鼠的Scr、BUN,消减蛋白尿,提高Ccr;3.清肾颗粒可减轻肾纤维化大鼠肾脏组织的病理损伤;4.清肾颗粒可降低肾纤维化大鼠肾组织中ERK1/2、p-ERK1/2、JNK1/2、p-JNK1/2的蛋白表达水平,通过抑制JNK及ERK1/2信号通路的活化从而达到延缓RIF的作用。