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第一部分基因DEFA1/3、DEFA4表达量的测定目的:检测DEFA1/3、DEFA4基因m RNA在Ig AN中的表达水平,探究DEFA1/3、DEFA4基因m RNA的表达水平与Ig AN的相关性。方法:收集Ig AN患者和健康体检者晨起空腹静脉血,收集血浆及提取全血RNA,采用染料法进行荧光定量PCR检测,ELISA法测定血浆HNP1–3浓度,统计分析DEFA1/3、DEFA4基因m RNA的表达水平和血浆HNP1–3浓度在两组中是否具有差异。结果:DEFA1/3 m RNA在Ig AN患者组中的表达水平为(1.18±0.55),在健康对照组中的表达水平为(0.84±0.63),前者明显高于后者,差异具有统计学意义(P<0.01);而DEFA4 m RNA在两组中的表达水平分别为(0.022±0.03)和(0.018±0.02),二者没有明显的统计学差异(P>0.05)。DEFA1/3、DEFA4 m RNA表达水平在性别、年龄、病理Lee分级上没有统计学差异(P>0.05)。此外,Ig AN组HNP1–3浓度(51.45±8.32)高于健康对照组(44.33±7.36),差异具有统计学意义(P<0.001)。结论:中国汉族人群Ig AN患者血浆HNP1–3浓度升高。DEFA1/3 m RNA在中国汉族人群Ig AN患者中的表达水平增高,而DEFA4 m RNA表达水平在Ig AN患者和对照者中没有明显的差异。DEFA1/3、DEFA4 m RNA表达水平与病理Lee分级没有明显的相关性。第二部分DEFAs基因多态性与Ig A肾病及其表型的关联研究分析目的:研究DEFAs基因与Ig AN的易感性之间的关系,探讨DEFAs基因SNPs等位基因频率和基因型频率与Ig A肾病的相关性。方法:从皖南医学院第一附属医院收集Ig AN患者134例和健康对照者136例,用Sanger测序法对两组人群进行DEFAs基因SNPs rs2615787、rs6984215、rs2738048、rs2738081位点基因分型,应用全自动生化分析仪对血清标本进行尿素、肌酐、血尿酸指标的测定。结果:Ig AN组较健康对照组尿素、肌酐、血尿酸(6.72±3.12 mmol/L vs4.20±1.05 mmol/L,P<0.01;113.35±64.70 umol/L vs 57.20±10.47,P<0.001;364.7±103.59 umol/L vs 283.66±61.01 umol/L,P<0.001)明显偏高。SNPs rs2615787、rs6984215、rs2738048基因型频率分布在两个人群中的分布具有统计学差异(P<0.01)。Ig AN SNP rs2615787 C等位基因频率为20.9%,健康对照组中为35.3%,差异有统计学意义(P<0.001)。SNP rs6984215 C等位基因频率、SNP rs2738048 C等位基因频率在Ig AN组分别为24.6%、25.4%,在健康对照组中分别为33.1%、34.6%,差异具有统计学意义(P<0.05),SNP rs2738081 A等位基因频率在Ig A肾病组为14.6%,在健康对照组中为19.1%,差异没有统计学意义(P>0.05)。结论:DEFAs基因可能是Ig AN的易感基因,DEFAs基因的SNPs rs2615787,rs6984215,rs2738048与Ig AN的易感性之间可能存在相关性,而与病理Lee分级之间没有相关性。第三部分DEFAs基因多态性位点的荧光素酶报告基因活性检测目的:构建含DEFAs基因SNP rs2615787、rs2738048等位基因的荧光素酶报告基因载体和和转录因子过表达载体,研究SNP rs2615787和rs2738048的不同等位基因对荧光素酶在细胞中表达的影响,评价rs2615787、rs2738048的等位基因状态对DEFAs基因的表达调控。方法:通过PCR合成rs2738048 T,rs2738048 C,rs2615787 A,rs2615787 C,并分别将其克隆到报告基因载体PGL3-promoter中;另外构建HSTF和CTF过表达载体,然后按PGL3 promoter+PCDNA-HSTF-NC、PGL3-rs2615787 A+PCDNA-HSTF、PGL3-rs2615787 A+PCDNA-HSTF-NC、PGL3-rs2615787 C+PCDNA-HSTF、PGL3-rs2615787 C+PCDNA-HSTF-NC、PGL3 promoter+PCDNA-CTF-NC、PGL3-rs2738048 T+PCDNA–CTF、PGL3-rs2738048 T+PCDNA-CTF-NC、PGL3-s2738048 C+PCDNA–CTF、PGL3-rs2738048 C+PCDNA-CTF-NC分组将构建成功的报告基因载体和过表达载体与海肾荧光素酶共转染到293工具细胞中,转染48小时后测定荧光素酶的相对活性。结果:通过酶切、测序鉴定,构建的报告基因载体和过表达载体与目的序列片段完全一致,载体构建成功。rs2738048 T和rs2738048 C报告载体都能在293细胞中表达,rs2738048的等位基因(T/C)状态能明显改变荧光素酶的相对活性,rs2738048 T等位基因的荧光素酶活性明显低于2738048 C等位基因,差异有统计学意义(P<0.01),且都能够结合转录因子CTH。rs2615787 A和rs2615787 C载体也都能在293细胞中表达,但rs2615787等位基因(A/C)对荧光素酶的相对活性没有显著影响。结论:成功构建了PGL3-rs2615787 A、PGL3-rs2615787 C、PGL3-rs2738048T、PGL3-s2738048 C报告基因载体和PCDNA–HSTF、PCDNA–CTF过表达载体。rs2738048 T等位基因的荧光素酶活性明显低于2738048 C等位基因,与T等位基因相比,2738048 C等位基因可能增加DEFA基因的转录活性。而rs2615787等位基因(A/C)对荧光素酶的相对活性没有显著影响。