论文部分内容阅读
目的:通过研究石蒜碱在体外对人肺癌NCI-H460细胞增殖的抑制作用及对NCI-H460细胞凋亡的影响,和体内对Lewis肺癌小鼠的抑瘤作用,探讨石蒜碱抗肿瘤机制,旨在为临床非小细胞肺癌的治疗寻找新的高效、低毒的化疗药物。方法:1.石蒜碱对NCI-H460的细胞毒作用(1)MTT法检测石蒜碱抑制NCI-H460细胞增殖的作用,(2)用流式细胞仪检测NCI-H460细胞的凋亡率,(3)比色法检测凋亡相关因子Caspase 3的活性;2.石蒜碱对Lewis肺癌小鼠的抑瘤作用(1)Lewis肺癌细胞株的培养,(2)小鼠Lewis肺癌移植瘤模型的建立,(3)处死小鼠,计算抑瘤率,脾脏指数及胸腺指数,(4)HE染色后观察细胞形态。结果:1.石蒜碱作用NCI-H460细胞24 h后,显微镜下观察细胞形态,经石蒜碱作用后,NCI-H460细胞外形不规则,细胞皱缩,大小不一,细胞破碎程度随给药剂量增加而增大,细胞数量逐渐减少。2.用石蒜碱处理NCI-H460细胞24 h后,,NCI-H460细胞增殖受到明显的抑制,与对照组相比差异显著(p<0.05,p<0.01),并呈现一定的浓度相关性。IC50为5.79±0.11μmol/L,表明石蒜碱能够有效抑制肺癌NCI-H460细胞增殖。3.随着石蒜碱处理浓度的升高,处理组细胞凋亡率逐渐升高,与生理盐水组相比差异显著(p<0.01)。最高浓度16μmol/L时,凋亡率达到46.2±3.46%。上述结果表明石蒜碱对NCI-H460细胞的凋亡具有诱导效应,并呈现一定的剂量依赖性。4.随着石蒜碱浓度的增加,Caspase 3的活性逐渐增高。石蒜碱处理组与生理盐水对照组比较,Caspase 3的活性显著升高(p<0.01)。结果表明石蒜碱可增强肺癌NCI-H460细胞的Caspase 3的活性,从而诱导NCI-H460细胞凋亡。5.与生理盐水组比较,石蒜碱低、中低、中、中高、高剂量组对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长均有抑制作用,其中以高剂量组(40 mg/kg)的作用最为显著,抑瘤率56.8%(p<0.01)。6.荷瘤小鼠实体瘤组织的HE染色实验结果显示生理盐水组肿瘤细胞生长均匀紧密,核固缩较少,无坏死或点状坏死;石蒜碱各剂量组及环磷酰胺组肿瘤细胞可见大量核固缩,核碎裂,肿瘤细胞数量减少,排列疏松,尤其以高剂量组(40 mg/kg)的作用最为显著,肿瘤细胞明显散在分布,数量明显减少。结论:石蒜碱在体外能有效地抑制NCI-H460细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与激活了Caspase 3的表达从而诱导肿瘤细胞凋亡有关;石蒜碱在体内亦能有效抑制小鼠Lewis肺癌细胞生长。