木豆叶中牡荆苷与异牡荆苷提取纯化工艺及其抗菌活性研究

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本文研究了超声提取木豆叶中同分异构体牡荆苷和异牡荆苷的工艺,并确定了大孔吸附树脂技术和柱层析技术分离纯化牡荆苷和异牡荆苷的较佳工艺条件,同时对木豆叶乙醇提取物及其乙酸乙酯萃取物的抗菌活性进行了研究。 1.全面系统地确定了检测牡荆苷和异牡荆苷的HPLC定量分析检测方法:色谱柱为ODS柱(4.6mm×25cm),检测波长330nm,流速1mL/min,进样量10gL,流动相CH3OH:0.4%H3PO4=35:65。 2.对木豆叶中的牡荆苷和异牡荆苷的超声提取条件进行了优化,对影响提取率的各个因素进行了考察,确定了最佳的超声提取工艺参数: 溶剂及液固比:60%乙醇,20:1 提取时间:45min 提取功率:250w 提取温度:40~50℃ 提取次数:3次 实验表明超声提取法提取率高,牡荆苷和异牡荆苷提取率分别为0.1856%和0.1385%。 3.对大孔吸附树脂分离纯化牡荆苷和异牡荆苷进行了研究,确定了ADS-5大孔吸附树脂分离纯化牡荆苷和异牡荆苷的分离条件,大孔吸附树脂分离纯化后所得产品中牡荆苷的含量为3.0146%,收率为57.3164%,异牡荆苷的含量为3.6416%,收率为61.8467%,最佳分离参数: 最佳树脂:ADS-5 温度:25℃ 上样液pH:3.5-4 上样液浓度:30mg/mL 吸附平衡时间:2h 动态吸附、解吸流速:1mL/min 4.确定了聚酰胺柱层析分离纯化牡荆苷和异牡荆苷工艺,得到含量为28.1451%的牡荆苷和6.5682%异牡荆苷粗品,收率分别为31.8612%和32.1248%;用硅胶柱层析继续纯化牡荆苷、异牡荆苷粗品,牡荆苷的含量由28.1451%达到83.1216%,收率为57.4153%:异牡荆苷的含量由6.5682%达到68.3653%,收率为52.3514%。 5.乙醇提取物对表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的MIC均为3.00mg/mL,而乙酸乙酯萃取物对三种相应的革兰氏阳性菌的MIC分别为1.50mNmL、1.50mg/mL和0.75mg/mL。由抑菌动态曲线表明,当木豆乙醇提取物及乙酸乙酯萃取物的浓度为2MIC(MBC)时,在前12小时细菌数量一直减少直至12小时,细菌完全被杀死。
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