恶性疟原虫顶端膜抗原蛋白胞外域在家蚕杆状病毒表面的展示及其免疫原性初步研究

来源 :浙江理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lvxiaoyongheyan
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恶性疟原虫项端膜抗原蛋白(Plasmodium falciparum apical membrane antigen1,PfAMA1)是理想的红内期疟疾疫苗候选抗原,其胞外域具有良好的免疫原性,可诱导机体产生中和抗体,用于疟疾疫苗的制备。   家蚕生物反应器表达外源蛋白具有生产成本低、天然性好、不含热原、安全性好等优点。杆状病毒表面展示系统做为一种新的真核表达系统,通过在杆状病毒囊膜蛋白gp64中插入外源蛋白,将外源蛋白展示在重组杆状病毒表面,通过纯化的重组杆状病毒可以做为疫苗原用于疫苗生产,相比传统疫苗具有产量高、易于操作、适用于大规模生产的特点。   本文尝试利用家蚕生物反应器制备恶性疟原虫PfAMA1胞外域抗原蛋白以及通过杆状病毒表面展示技术将PfAMA1胞外域蛋白展示于BmNPV表面以研究其用于制备疟疾疫苗的可行性。首先,我们原核表达了恶性疟原虫PfAMA1胞外域蛋白,亲和层析纯化后免疫新西兰雄兔获得检测抗体。然后,利用家蚕Bac-to-Bac系统在家蚕蛹中高效表达了PfAMA1胞外域蛋白。通过匀浆、分级离心、超滤和亲和层析等方法纯化重组蛋白,获得的重组蛋白含量高达126.5 mg/kg蚕蛹,将重组蛋白免疫新西兰雄兔,经检测表明其抗血清对原核表达的PfAMA1胞外域蛋白具有专一性的特异性。进一步地,我们构建了融合BmNPVgp64信号肽和跨膜区的pFastBacl-gp64-AMA1转移载体,利用Bac-to-Bac系统获得了重组杆状病毒BmNPV-gp64-AMA1。接种家蚕幼虫及蛹后经匀浆、分级离心、超滤、超速离心等方法纯化获得重组病毒粒子,免疫新西兰雄兔获得抗血清,通过ELISA检测血清效价达1:3200。本研究证实利用家蚕杆状病毒表面展示技术可有效在BmNPV病毒表面展示PfAMA1胞外域,为制备新型疟疾疫苗打下基础。
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