论文部分内容阅读
酸性多糖是动物源海产的重要营养功效成分。本文以三种海洋动物酸性多糖鲍鱼性腺多糖(AGSP)、硫酸软骨素(CS)及海参多糖为研究对象,采用高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)分析它们的酸降解产物,并建立了相应的定性分析及定量检测方法,其主要研究内容及结果如下:(1)为了分析弱酸对鲍鱼性腺多糖的降解作用,对用不同浓度三氟乙酸(TFA)降解的产物进行1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生化,并采用高效液相色谱-多级质谱(HPLC-MSn)检测。结果表明,在AGSP的弱酸降解产物中检测到了 2种二糖(DS1、DS2)和1种四糖(TS)。2种二糖均是由己糖醛酸通过糖苷键连于己糖,其中DS2的结构确定为β-GlcA(1-→2)-Man,而TS是由2个DS2连接而成,且在100 ℃加热1 h的条件下,0.1～2.0mol/L的TFA浓度范围内,这3种寡糖的产率都随着酸浓度的增加呈升高趋势。(2)由于已知的鉴定复杂生物基质中的硫酸软骨素的方法操作过程繁琐,耗时长,且对样品的纯度要求高,我们建立了一种酸降解结合PMP-HPLC-MSn分析硫酸软骨素的方法。首先,对猪骨和鲨鱼硫酸软骨素标准品进行酸水解,降解产物经PMP衍生化后,利用HPLC-MSn进行检测。经过多级质谱分析,鉴定出了包括二糖、三糖和四糖在内的11种特征寡糖片段,其中一些寡糖还被硫酸基或乙酰基取代。同时,我们考察了TFA浓度(0.1～2.0mol/L)对这些寡糖产率的影响,结果表明,推荐使用TFA浓度范围为0.2～0.8mol/L。然后,将该分析方法应用于从鲟鱼脊骨、猪喉管软骨和海参体壁中经简单提取得到的硫酸软骨素的检测,以这11种寡糖为依据,实现对这三种样品中的硫酸软骨素结构的分析鉴定。(3)海参多糖是不可或缺的海参营养评价指标,为了控制和评估海参及其制品的质量,我们建立了一种定量分析海参多糖的方法。通过PMP-HPLC-MS/MS技术分析酸降解产生的硫酸软骨素二糖片段和岩藻糖(Fuc),建立海参中岩藻糖基化硫酸软骨素(FucCS)和岩藻多糖的定量分析方法。方法学考察结果表明,在0.02～0.2mg/mL的浓度范围内硫酸软骨素二糖和岩藻糖含量均具有良好的线性关系,其回收率为99.2%和100.2%,重复性以及稳定性的相对偏差(RSD)均小于10%。应用该方法检测发现,新鲜海参中岩藻聚糖和岩藻糖基化硫酸软骨素的含量分别为0.12 mg/g、0.46 mg/g,水发海参中的两者含量分别为0.07 mg/g、0.29 mg/g。说明水发海参在水煮、泡发等加工过程中的酸性多糖存在损失。对于9种不同来源地的鲜海参,通过比较化学方法、水产行业标准法及本实验方法测得的酸性多糖含量,发现每种方法所测结果不具有明显相关性,不同采样地点及养殖方式的海参多糖含量有一定差异。本论文的研究成果提供了鲍鱼性腺多糖、硫酸软骨素及海参多糖的酸降解产物信息,并建立了更为快速有效的分析检测方法,为这些海洋动物酸性多糖的开发利用和相关产品的质量控制提供了科学依据和检测手段。