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目的:观察格列齐特是否能改善糖尿病大鼠的心肌损伤,并探讨这种保护作用是否通过调控Rho蛋白为小分子鸟苷酸结合蛋白(RhoA),及下游效应蛋白Rho激酶1(ROCK1)及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)。方法:1.动物实验:60只8周龄的雄性SD(Sprague Dawley)大鼠,体质量(200±20)g,自由饮水和饮食。适应性喂养一周后,随机抽取10只作为正常对照组(NC,n=10),其余大鼠采用高糖高脂饲料合并腹腔注射链脲佐菌素(streptozocin,STZ)的方法来建立糖尿病大鼠模型。剔除不合格的大鼠后,将造模成功的糖尿病大鼠随机分为糖尿病模型组(MC,n=9)、格列齐特组(Glic,n=10)、格列本脲组(Glib,n=10)、法舒地尔组(Fas,n=9)。格列齐特组(80mg/kg)和格列本脲组(2.5 mg/kg)采用灌胃,正常对照组和糖尿病模型组每日灌胃相应剂量蒸馏水,法舒地尔组(10 mg/kg)腹腔注射给药。连续给药8周,每周测定一次大鼠体质量(BM)和空腹血糖(FBG)。试验结束后禁食12小时,麻醉后腹主动脉取血,摘取大鼠心脏。测量大鼠心脏质量,计算心脏质量指数(HWI);测定各组糖化血红蛋白(HbA1c)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)含量以及血清丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活性;通过HE和Masson染色,观察心肌病理变化和组织胶原纤维水平;TUNEL染色观察并计算心肌细胞的凋亡率;Western blot法检测心肌组织中RhoA、ROCK1、eNOS、Bcl-2和Bax蛋白表达。2.H9c2细胞实验:将H9c2细胞接种到培养基中,并随机分为正常组(NC)、模型组(MC)、渗透压对照组(OS)、格列齐特低剂量组(Glic+L)、格列齐特高剂量组(Glic+H)、格列本脲组(Glib)、法舒地尔组(Fas)。NC组和OS组采用5.5 mmol/L葡萄糖培养,其余各组在葡萄糖浓度为35 mmol/L培养基中培养72 h。采用MTT法检测各组H9c2细胞活力;按要求测定各组SOD活性,MDA和ROS水平;流式细胞术检测各组细胞凋亡水平。结果:1.动物实验:(1)与NC组相比,MC组大鼠体质量下降明显,FBG升高显著(P<0.01);经Glic治疗后,大鼠FBG、HWI、HbA1c、TC、TG、LDL-C和MDA降低,SOD和HDL-C升高(P<0.01或P<0.05)。(2)HE染色结果显示,MC组心肌组织细胞变形,排列杂乱,细胞发生肥大且发生坏死,Glic组和Fas有所改善。(3)Masson染色可以看出,MC组心肌组织细胞分布紊乱且细胞间基质较多,被染色的纤维化面积较大,Glic组和Fas被染色的组织胶原明显少(P<0.01)。(4)MC组心肌细胞排列杂乱且TUNEL阳性细胞的数量明显增多,而Glic组发生凋亡的细胞明显减少(P<0.01)。(5)与NC组相比,MC组Bax、RhoA、ROCK1蛋白水平明显上升,而eNOS、Bcl-2蛋白水平明显下降(P<0.01或P<0.05)。与MC组相比,Glic组明显下调RhoA、ROCK1、Bax蛋白表达并增加eNOS、Bcl-2蛋白表达(P<0.01或P<0.05)。2.H9c2细胞实验:(1)与正常组相比,模型组细胞增殖能力明显降低,活力下降(P<0.01),ROS和MDA含量升高,SOD活性降低,凋亡率明显增高(P<0.01)。(2)格列齐特与法舒地尔均可以改善高糖诱导的H9c2细胞活力和凋亡状态(P<0.01或P<0.05),格列齐特可以提高SOD活性,降低ROS和MDA水平,改善H9c2细胞的氧化应激。结论:1.格列齐特可明显改善糖尿病大鼠心肌损伤并减轻心肌细胞凋亡水平,其机制可能与降低血糖改善氧化应激状态,调控RhoA/ROCK1/eNOS信号通路有关。2.高糖诱导H9c2细胞细胞凋亡增加,格列齐特和法舒地尔可以改善氧化应激并减轻细胞凋亡。