两株链霉菌抗菌代谢产物的分离鉴定及其产抗基因的检测

来源 :黑龙江大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hw565656
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
链霉菌产生的很多次级代谢产物已被成功的应用于农业有害生物综合治理,但由于植物病原真菌具有种类多、变异性强、易产生抗药性等特点,现有的生物农药不能完全应对实际生产问题,因此开发新的农用抗生素一直是植物保护领域的重要研究方向。本课题主要对微白黄链霉菌(Streptomyces albidoflavus)HD-103和比基尼链霉菌(Streptomyces bikiniensis)HD-087的产抗基因进行了检测,对培养液中的脂肽进行了初步分离,并在此基础上对脂肽粗提物的理化性质和抗菌作用进行了分析。产抗基因的检测结果表明:S.albidoflavus HD-103、S.bikiniensis HD-087中均含有nrps基因,序列长度约为500 bp,经比对可知,与Streptomyces sp.OAct 620中的非核糖体多肽合成酶的基因相似度分别为89%、88%;均含有itu基因,序列长度均为1200 bp,与Streptomyces sp.Scae MP-e83、Streptomyces sp.Osp MP-M43的itu基因相似度分别为86%、99%;没有检测出fen和sfp基因。通过酸沉醇提法得到抗菌粗提物,经质谱鉴定后,HD-103抗菌粗提物中的肽类物质能与106个已知蛋白相匹配,HD-087则与64个已知蛋白相匹配,二者匹配度和可信度较高的已知蛋白中均含有非核糖体多肽合成酶。稳定性试验表明HD-087脂肽对紫外照射、酸碱处理和有机溶剂的耐受性更好,HD-103脂肽对热和蛋白酶的稳定性更好。另外,2株链霉菌的脂肽均具有溶血性和排油活性,HD-087的排油性更好,排油圈直径可达70 mm,薄层层析(TLC)检测结果表明,2株菌的粗提物均含有4个脂肽组分。对抗菌脂肽进行分离纯化,Superdex Peptide 10/300 GL凝胶柱分离结果表明0.5 m L/min的洗脱流速分离效果更好;硅胶柱层析可以有效的分离脂肽的各个组分,但当以氯仿/甲醇/水为展层剂时,其中氯仿使抗菌成分活性降低,而以甲醇/水为展层剂时,分离效果不理想,但可以保持抗菌活性;2株菌的脂肽粗提物经HPLC分离后均可出现4个洗脱峰,但2个菌的峰高、峰宽和出峰时间有所不同。抗菌谱测定结果表明:2株菌的抗菌脂肽均对革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌没有抑制作用,但具有广谱抗植物病原真菌活性,其中HD-087的抗真菌效果更好。对禾谷镰刀菌的抗菌机理分析表明,HD-103和HD-087产生的脂肽对真菌孢子的形成、萌发和菌丝体生长均有显著的抑制作用,并且都能破坏菌丝细胞的渗透性和完整性,使膜透性增大,导致蛋白质和核酸泄漏,对孢子萌发的MIC值分别为0.625 mg/m L、0.313 mg/m L,对菌丝体干重的EC50值分别为3.183 mg/m L、2.251 mg/m L。
其他文献
背景和目的烟曲霉是一种广泛存在于大自然的机会性致病菌,产生的孢子是它感染的媒介,由于孢子直径很小,所以很容易被吸到肺泡。健康的人群会通过肺部的防御机制很快清除孢子,然而,存在自身免疫缺陷的人群,由于免疫力的改变或者下降,一旦吸入孢子,孢子将会在肺内发芽导致严重的感染。其中,侵袭性曲霉菌病(IA)是曲霉菌病中比较严重的一种疾病,死亡率可达到50%~95%。烟曲霉被准确的鉴定对于曲霉病的患者及时制定正
学位
目的:探讨GCs-SGK1-ATP信号通路在术前焦虑诱发的持续性术后疼痛中的作用及机制。方法:成年雄性Sprague Dawley大鼠452只,6~8周龄,体重200~250 g,采用随机数字表法分为28组:对照组(C组,n=40),切口组(Ⅰ组,n=40),术前焦虑组(A组,n=40),模型组(AI组,n=40),对照组+溶剂对照组1(C+Veh1组,n=8),对照组+氟代柠檬酸组1(C+FC1
学位
羽毛粉可以作为一种高蛋白的畜禽类饲料使用,蛋白质含量可达其干重的85%。羽毛粉中的蛋白质主要为角蛋白,其分子结构复杂,同时还与10%左右的脂肪共存,高含量的脂肪阻碍了微生物对羽毛粉的降解,也因此难以被胃蛋白酶、木瓜蛋白酶等常规蛋白酶降解,导致其消化率较低,在饲料中添加的比例不能超过5%,否则会导致畜禽类营养不良。因此找到适合的羽毛蛋白降解方法,提高其消化率,对充分利用羽毛粉蛋白资源具有一定的意义。
学位
本文采用无模板剂的预制晶种法合成了不同Si/Al比的纳米ZSM-5分子筛。分别采用液相沉积法、原位合成法和二次合成法制备了 Ga改性的纳米ZSM-5分子筛,采用碱脱硅的后处理方法及引入介孔模板剂的原位合成方法制备了具有多级孔结构的原位合成Ga同晶置换的纳米ZSM-5分子筛。通过XRD、SEM、27A1 MAS NMR、29Si MAS NMR、71Ga MAS NMR、N2物理吸附、NH3-TPD
学位
本文采用水热法合成了系列不同硅铝比的Beta分子筛,并采用柠檬酸对其进行脱铝改性,通过原位同晶置换的方法合成了 Fe部分置换的(Fe,Al)Beta分子筛,采用等体积浸渍法担载0.5wt.%Pd制备了 0.5Pd/Beta系列双功能催化剂。采用XRD、XRF、SEM、N2物理吸附、NH3-TPD和H2化学吸附等表征手段对各催化剂的结构、组成、形貌、酸性和金属分散度进行了表征,并以正十六烷加氢异构化
学位
随着人口增长和社会经济的发展,研究和培育耐盐作物对开发利用盐渍土具有重要意义。本试验以甜菜T710品系与其突变体甜菜为试验材料,设置对照组(CK)和280 m M Na Cl盐处理组,测定了甜菜叶片的生理指标特性,并进行甜菜转录组学的研究,结果表明:(1)盐胁迫下,甜菜T710和T710-MU幼苗生物量均下降,且T710-MU生物量降低幅度小于T710,说明T710-MU幼苗耐盐性高于T710;(
学位
莠去津是玉米田常用长残效除草剂,虽能有效防除农田杂草并提高农作物产量,但其长期应用导致农业生态环境的持续污染,尤其是对土壤生态系统影响日益突出。土壤微生物是反映土壤生态系统健康状况的敏感性指标,系统地从传统、生化和分子等角度明确农药对不同耕作土层土壤微生物群落结构多样性影响,对评价耕作土壤生态系统安全以及农药的科学应用具有重要理论指导意义。本研究以寒地黑土玉米连作区土壤为研究对象,阐明莠去津对不同
学位
本研究由采自于黑龙江省帽儿山脚下水稻田的染病水稻叶片中分离得到一株病原菌SDH,经过形态学观察以及ITS序列比对分析,确定其为禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)。在对菌株SDH的发酵过程中加入小分子表观遗传学试剂烟酰胺对其进行调控,并对其正丁醇提取物进行HPLC分析,发现保留时间在22.5 min时有新的色谱峰出现。推测由于加入组蛋白去乙酰化酶抑制剂烟酰胺,能够结合到组蛋白去乙
学位
本论文设计并合成了两对互为对映体的新型手性二齿羧酸配体:(R)-4-(1-羧基乙氧基)-[1,1’-联苯]-4-羧酸((R)-H2cbca)、(S)-4-(1-羧基乙氧基)-[1,1’-联苯]-4-羧酸((S)-H2cbca)、(R)-6-(1-羧基乙氧基)-2-萘甲酸((R)-H2cna)和(S)-6-(1-羧基乙氧基)-2-萘甲酸((S)-H2cna)。这两对手性配体分别与过渡金属和稀土金属构
学位
沙枣(Elaeagnus Angustifolia)属胡颓子科(Elaeagnaceae)胡颓属(Elaeagnus Lnn),主要分布在我国华北、西北等地区。沙枣是一种具有多种用途的植物。沙枣的花、叶及果实在药物提炼及食品加工等领域具有较高的经济利用价值。沙枣因其具有抗旱、耐盐碱的优良特性,所以被称作为沙荒、盐碱地的“宝树”。因此沙枣已被列为干旱和盐碱地区的重要种植树种。沙枣的根系上存在可固氮的
学位