PCV2的分子流行病学分析及PCV2嵌合重组病毒的制备

来源 :东北农业大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:gideonkim
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猪圆环病毒2型(porcine circovirus2, PCV2)是无囊膜的小单链环形DNA病毒,其大小约为1.8kb,属于圆环病毒科、圆环病毒属。根据PCV2序列分析显示,PCV2可以分为3个主要的基因型(PCV2a、PCV2b和PCV2c)。PCV2a可以进一步分为六个亚型(2A至2F);PCV2b又可以分为三个亚型(1A1B和1C)。该病毒能引起PCV2相关疾病(porcine circovirus type2-associated diseases, PCVAD),临床症状为全身感染、肺炎、肠炎、繁殖障碍与猪皮炎和肾病综合症及断奶仔猪多系统消耗综合征等症状。PCV2已经对包括我国在内的世界各国养猪业造成了严重的经济损失。猪细环病毒(Torque teno sus virus, TTSuV)包含一个单链、环形、无囊膜的DNA,其基因组大小为2.8kb,为指环病毒亚科,细环病毒属,TTSuV主要包括TTSuVl和TTSuV2。TTSuV1和TTSuV2都有较高的流行率,并且在临床患病动物中的发生率要高,与PCVAD和PCV2有明显联系。为了解2012年我国部分地区临床患病猪和健康猪群PCV2感染情况,以及PCV2流行株的基因型,本研究应用聚合酶链式反应(PCR)方法对来自山东、福建、安徽、河北、河南、广西、辽宁和湖北等8个省份的245份样品进行PCV2的检测,结果显示,PCV2的感染率为73.47%,随机选择61个PCV2阳性序列根据Cap基因进行亚型分析,结果分别为PCV2a、PCV2b1C和PCV2b1A1B亚型,各为8、19和34株。结果表明,上述地区的患病猪群和健康猪群中普遍存在PCV2感染,并且在上述地区流行的PCV2主要为PCV2b1A1B亚型。为了了解现地不同基因型之间PCV2的自然重组情况,我们对39个PCV2全基因组序列进行聚类分析。此外,应用重组分析软件对其自然重组事件进行研究和特征描述。结果发现三株自然重组株,其中AHF13和AHF14分离株属于PCV2a与PCV2b1B基因型之间重组,AHF9属于PCV2b1A1B与PCV2b1C亚型之间重组。重组软件分析显示AHF13和AHF14的重组区域位于ORF2区域,而AHF9的重组区域位于ORF1区域。这表明在自然情况下存在基因型之间和基因型内部的重组事件,这为本病的预防和疫苗的研究提供了重要信息。我们以PCV1分离株基因组为骨架,用PCV2分离株AHF3的ORF2和ORF2ori分别替代PCV1的ORF2和ORF2ori,构建成功PCV1-2和PCV2-1重组克隆,在PK15细胞系连续传代,获得遗传学稳定的感染性病毒。腹腔接种BALB/c小鼠,连续传2代后,PCV1-2、PCV2-1和PCV2的核苷酸序列均没有任何改变,表明PCV1-2和PCV2-1重组病毒能在小鼠体内稳定遗传。本研究将为PCV2的防控提供了良好的候选疫苗株。
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