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鱼干是沿海区域的风味腌制水产品,在加工贮藏过程中其极易受到环境中的真菌及其真菌毒素污染。据不完全统计鱼干普遍受到镰孢菌(Fusarium spp.)和曲霉(Aspergilus spp.)的严重污染,同时带有高污染量的AFB1毒素(AFB1)与T-2毒素(T-2)。AB1与T-2均属于强毒性真菌次生代谢产物,会导致肝脏、免疫系统严重损伤,并且还能诱发肠道菌群结构紊乱。因此,摄入AB1与T-2污染的鱼干会给公众健康带来潜在的安全风险,所以,鱼干制品中AB1与T-2毒性消减是防控其危害关键科学问题之一。研究表明,酵母(Saccharomyce)及其代谢产物可以保护动物机体免受真菌毒素的侵害,不仅能够显著缓解动物真菌毒素中毒症状,还能改善动物的胃肠道功能和消化能力,但关于酵母在动物体内消除真菌毒素毒性的作用机制仍鲜有报道。同时,宏基因组学研究结果已表明肠道菌群与宿主的免疫系统和肝脏功能有关,其数量和组成的改变可能会反向调控宿主的健康,表明肠道菌群可能是酵母消除真菌毒素毒性的潜在作用靶点。因此,本研究拟采用酵母发酵液对分别饲喂鱼干中AFB1和T-2小鼠进行干预,考察酵母发酵液对机体暴露于鱼干中AFB1与T-2后的损伤干预效应机制,为进一步通过添加酵母发酵液的途径降低鱼干中AFB1与T-2对健康损伤提供理论依据。本研究选择红鱼干中污染量最高的两种真菌毒素:AFB1和T-2,以及团队前期分离出的一株季也蒙毕赤酵母(Pichia guilliermondii MH 211588.1,PG),将红鱼干+AFB1、红鱼干+T-2、PG发酵液+红鱼干+AFB1、PG发酵液+红鱼干+T-2分别灌胃至SPF小鼠以及伪无菌小鼠(pseudo-germfree mice,PM),7d后,使用血液分析仪测定小鼠外周血细胞变化;使用酶标仪测定小鼠肝功能酶活变化;采用高通量测序法测定小鼠肠道菌群数量与组成变化,探讨PG发酵液对饲喂鱼干中AFB1与T-2小鼠的免疫损伤、凝血障碍、肝损伤和肠道菌群紊乱的干预效应,使用pearson相关系数分析方法筛选与之相关的菌群,并应用自主建立的PM小鼠模型验证肠道菌群是否为PG发酵液发挥其干预作用的靶点。结论:(1)红鱼干中AFB1与T-2毒素对小鼠的免疫毒性和肝毒性及PG发酵液的干预作用:红鱼干中AFB1能诱导小鼠血液中白细胞(WBC)、淋巴细胞(LYM)数量显著降低(P<0.05);血小板(PLT)数量,酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)酶活与谷草转氨酶与谷丙转氨酶比值(AST/ALT)显著升高(P<0.05),说明红鱼干中AFB1具有明显的免疫毒性和肝毒性。同时,红鱼干中T-2毒素能引起小鼠血液指标显著降低与肝脏中中功能酶活显著增加,说明红鱼干中T-2毒素具有明显的免疫毒性、血液毒性和肝毒性。加入PG发酵液后,小鼠各指标均与空白组无差异(P>0.05),说明PG发酵液对红鱼干中AFB1与T-2毒素诱导小鼠的免疫毒性和肝毒性具有良好的干预作用。(2)红鱼干中AFB1与T-2毒素对小鼠肠道菌群紊乱及PG发酵液的干预作用:肠道菌群测定结果表明,红鱼干中AFB1与T-2均能使小鼠肠道Alpha多样性与Beta多样性显著降低;同时红鱼干中AFB1与T-2显著改变小鼠肠道菌群组成,主要是影响 Prevotellaceae、Bacteroidales S24-7、Clostridiaceae、Alcaligenaceae 等菌群相对丰度,并且这些菌群相对丰度与血液指标和肝功能酶活具有显著相关性(P<0.05)。加入PG发酵液进行干预后,小鼠肠道菌群多样性以及组成丰度均与对照组无差异(P>0.05),并且显著降低 Prevotellaceae、Bacteroidales S24-7、Clostridiaceae、Alcaligenaceae等菌群与血液指标和肝功能酶活的相关性,说明PG发酵液对AFB1与T-2诱导肠道菌群结构和组成变化有较好的干预作用,并可能通过调节Prevotellaceae、Bacteroidales S24-7等菌群丰度来干预AFB1与T-2毒性。(3)红鱼干中AFB1与T-2毒素对伪无菌小鼠免疫毒性和肝毒性及PG发酵液的干预作用:万古霉素、新霉素、甲硝唑混混合灌胃3天后,正常SPF小鼠肠道大部分的优势菌群杀灭,肠道菌群数量与种类均显著下降(P<0.05),构建的PM小鼠模型符合实验要求。与SPF小鼠相比,饲喂红鱼干中AFB1与T-2的PM小鼠外周血中WBC、LYM、PLT等血液指标显著升高(P<0.05),ACP、AKP以及AST/AKT酶活显著降低(P<0.05),说明红鱼干中AFB1与T-2的免疫、血液、肝脏毒性与肠道菌群数量以及种类相关;同时PG发酵液对饲喂红鱼干中AFB1与T-2的PM小鼠外周血中WBC、LYM、PLT等血液指标显著下降(P<0.05),ACP、AKP以及AST/AKT酶活显著上升(P<0.05),说明PG发酵液对红鱼干中AFB1与T-2毒性的干预作用被减弱,证明肠道菌群数量与种类是PG发酵液发挥其对红鱼干中AFB1与T-2毒性的干预作用的靶点。