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目的本文通过构建大鼠大脑中动脉闭塞模型(Middle Cerebral Artery Occlusion,MCAO)模拟缺血性脑卒中来研究清达颗粒(QingDa granule,QDG)对大鼠脑缺血再灌注损伤(Cerebral Ischemia Reperfusion Injury,CIRI)后局部炎症反应的影响,从NF-κB信号通路探讨清达颗粒对CIRI后的保护机制。以期进一步阐明清达颗粒治疗缺血性脑卒中的作用机制,为临床应用清达颗粒治疗缺血性脑卒中提供进一步的实验依据。方法取体重在250~280 g的雄性SD大鼠,采用硅胶线栓制备大鼠MCAO模型,缺血1.5 h后拔出线栓行再灌注,假手术组(SHAM)不插入线栓。在术后24 h随机选择3只造模组大鼠进行新鲜组织取材,用TTC染色法对组织进行染色观察,同时对其余术后大鼠行核磁共振成像法(MRI)观察模型是否成功。然后将成功的模型随机分为模型组、清达颗粒0.8 g/kg.d组、清达颗粒1.6 g/kg.d组,分别标示为MCAO组、MCAO+QDG-L组、MCAO+QDG-H组。除清达颗粒干预组给予清达颗粒干预外,其余组别给予等量的生理盐水,均经灌胃途径给药。干预期间,每日测评各组大鼠的体重和神经行为学变化。7天后,对各组大鼠用4%多聚甲醛经左心室灌注后收集脑组织,每组8只。采用HE染色法观察各组大鼠患侧皮质区的病理变化,GFAP标记星形胶质细胞法观察各组大鼠患侧皮质区的星形胶质细胞的表达,IHC检测各组大鼠患侧皮质区局部炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达量和NF-κB的上游基因IκB、IKK的表达,IF检测各组大鼠患侧皮质区NF-κB核移位情况。结果1.体重测量结果显示,与SHAM相比较,术后24 h各手术组大鼠体重明显下降,从术后第4 d时,清达颗粒干预组体重降幅开始趋缓,直至术后第7 d,与MCAO组大鼠相比较,清达颗粒干预组体重降幅明显缩小。2.神经行为学评分显示,脑缺血再灌注24 h时(干预前),与SHAM相比较,手术组神经行为学评分显著升高,清达颗粒干预7d后,大鼠神经行为学评分均下降。3.脑组织HE染色结果显示,SHAM组脑组织无水肿,神经细胞排列整齐,形态完整,胞浆染色均匀,无细胞坏死现象;MCAO组患侧皮质区出现细胞排列杂乱、间质水肿、间质疏松化,神经元细胞数目减少、细胞核固缩、碎裂溶解,大量炎症细胞浸润;清达颗粒干预后,大鼠患侧皮质区病理性改变有所改善,清达颗粒高、低剂量组效果未见明显差异。4.用GFAP标记星形胶质细胞结果发现,CIRI 7 d后,与SHAM组比较,MCAO组大鼠患侧皮质区GFAP明显激活,数量增多,而清达颗粒干预后,抑制了GFAP的激活,星形胶质细胞数量显著减少,且清达颗粒高剂量组比低剂量组效果更好。5.IHC结果显示,与SHAM组相比较,MCAO组大鼠患侧皮质区IL-1β、IL-6、TNF-α表达明显增高,给予清达颗粒干预后下调了大鼠患侧皮质区炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达,清达颗粒高、低剂量组效果未见明显差异。6.IHC结果显示,与SHAM组相比较,MCAO组大鼠患侧皮质区IKK、IκB磷酸化表达增多,给予清达颗粒干预后患侧皮质区IKK、IκB的磷酸化表达减少;而SHAM组、MCAO组、QDG-L和QDG-H四组相比较,总IκB蛋白表达无差异。7.IF结果揭示,与SHAM组相比较,MCAO组大鼠患侧皮质区NF-κB p65被激活,入核数量明显增多,清达颗粒干预后可抑制NF-κB p65的入核反应,入核数量显著减少,且清达颗粒高剂量组抑制效果比低剂量组抑制效果更明显。结论1.清达颗粒能够阻止CIRI后体重的减轻,促进体重的恢复。2.清达颗粒有效改善CIRI后神经功能缺损。3.清达颗粒改善CIRI后患侧皮质区病理损伤。4.清达颗粒抑制CIRI后患侧皮质区GFAP激活,减轻炎症损伤,且高剂量组更有效。5.清达颗粒可通过下调CIRI后患侧皮质区IL-1β、IL-6、TNF-α的表达,减轻炎症损伤。6.清达颗粒可通过抑制NF-κB信号通路中IκB,IKK磷酸化,减少NF-κB的入核转录,减轻脑CIRI后炎症损伤。