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本课题建立了射频局部治疗小鼠皮下移植性肝癌动物模型，比较了不同热剂量时的治疗效果和温度差。并应用细胞培养、光镜和电镜观察、MTT方法、双色流式细胞技术、酶联免疫吸附技术、逆转录多聚酶链反应等方法，观察了射频治疗后的病理变化，荷肝癌H22小鼠脾淋巴细胞体外增殖活性、细胞毒作用、细胞因子分泌功能及其mRNA表达水平。主要结果和结论如下： 1、用不同温度射频局部治疗BALB／C小鼠移植性H22肝癌。70℃、65℃、60℃射频治疗组小鼠治愈率分别为100％、100％、66.7％；小鼠死亡率分别为56.7％、46.7％、40.0％；小鼠复发率分别为0％、0％、33.3％；射频治疗温度与肿瘤组织表面温度差分别为2.69±0.14℃、2.76±0.16℃、3.00±0.16℃。小鼠治愈率、复发率和温度差60℃治疗组与70℃、65℃治疗组有显著性差异（P＜0.05）。光镜组织学检查示：射频治疗即刻，靶区肿瘤细胞胞体固缩，核浓缩变形，核碎裂；电镜检查示：肿瘤细胞核碎裂，呈絮状溶解，细胞器消失，膜性结构断裂，表现为不可逆性坏死。综合以上结果，我们认为射频治疗小鼠肝癌是有效的、可行的。推荐使用治疗剂量为70℃或65℃5min，而以65℃ 5min较佳，因为在该治疗剂量时小鼠有较高的治愈率和较低的死亡率。该动物模型适合用于射频后观察免疫效应等研究。 晰江大李博士母‘格大 2、MTT法检测正常组、正常前组、治疗前组、射频后1周组、射频后2周组、射频后3周组、手术后1周组、手术后2周组、手术后3周组、荷瘤后l周组、荷瘤后2周组、荷瘤后3周组、正常l周组、正常2周组、正常3周组小鼠脾淋巴细胞增殖活性，结果显示:荷瘤后2周增殖活性显著低于治疗前组（P<0.05），荷瘤后3周显著低于正常组及治疗前组（P<0 .05）;手术组和正常对照组处理前后无显著性差异（P>0.05）;射频后2周和3周均显著高于正常、治疗前及射频后1周组（尸<0 .05）;射频后1周与正常一周组无显著性差异（P>0.05），但显著高于手术后1周组（P<0 .05）;射频后2周和3周组分别高于手术后2周和3周组，也显著高于正常2周和3周组（P<0 .05）;同时期手术组与正常对照组比较无显著性差异（P>0.05）。双色流式细胞技术检测上述各组细胞毒作用，结果显示:效/靶比为30:1时，各组靶细胞死亡百分率较效/靶比为15:1时升高。荷瘤后3周组细胞毒作用显著低于同一效靶比的正常、治疗前、荷瘤后l周、荷瘤后2周组（尸<0 .05）;手术和正常对照组处理前后同一效靶比之间无显著性差异（P>0.05）;射频后1周和2周组均显著高于同一效靶比的正常、治疗前、射频后3周组〔p<0 .05);射频后1周和2周组分别高于同一效靶比的手术后1周和2周组（P<0 .05），也显著高于正常1周和2周组（P<0.05）;同一效靶比的同时期手术组与正常对照组比较无显著性差异（P>0.05）。据此结果推测，射频治疗荷肝癌日::小鼠后，原位留置的灭活肿瘤细胞可能具有同源肿瘤的抗原性，能够激活小鼠脾淋巴细胞，促进其活化、增殖，增强对同源肿瘤细胞的杀伤，可能起到了“原位固化瘤苗”的作用。 3、ELISA检测各组小鼠脾淋巴细胞的细胞因子分泌，结果显示:荷瘤组自荷瘤后2周起IL一2、IFN一Y低于正常组（p<0.05），IL一4高于正常组（p<0.05）;IL一10荷瘤后3周高于正常组（P<0.05）。射频组自射频后2周起IL一2高于正常（P<0.05），射频后3周较射频后2周显著下降（P<0.05）;IFN一Y自射频后1周起高于正常（P<0.05），射频后3周较射频后2周显著下降（P<0.05）;IL一4自射频后1周起低于正常（P<0.05），射频后3周仍维持在低于正常水平印<0.05);IL一10自射频后2周起低于正常（P<0.05），射频后3周较正常略低印<0.05)。比较射频组和手术组发现:IL一2射频后2周高于手术后2周和正常2周组（P<0.05）;IFN一Y射频后1、 晰卜大李博士毋位备人2、3周高于手术后l、2、3周及正常l、2、3周组（p<0.05）;IL一4射频后l、2、3周低于手术后l、2、3周及正常l、2、3周（p<0.05）:IL一10射频后2周低于手术后2周和正常2周组（P<0.05）;而四种细胞因子浓度手术后1、2、3周与相应正常1、2、3周组比较没有显著性差异（P>0.05）。采用Rl’- pCR技术，检测射频后2周、手术后2周、荷瘤后2周及正常2周组，小鼠脾细胞IL一ZmRNA、IFN一￥mRNA、IL一4mRNA和IL一10mRNA表达水平，结果表明:IL一ZmRNA和IFN一YmRNA荷瘤后2周显著低于手术后2周及正常2周组（P<0.05），三者皆低于射频后2周组（P<0.05）;IL一4mRNA射频后2周低于手术后2周和正常2周组（P<0 .05），三者皆低于荷瘤后2周组（P<0.05）;IL一lomRNA射频后2周低于手术后2周和正常2周组（P<0.05），荷瘤后2周大于正常2周组（P<0.05）。上述实验结果提示，射频治疗后原位留置的灭活肿瘤组织，能够激活机体免疫系统，促进Thl类细胞因子分泌及基因转录，使荷瘤机体由ThZ向Thl逆转，提高由Thl细胞介导的抗肿瘤细胞免疫功能。 射频能有效治疗小鼠H::肝癌，能够促进小鼠脾细胞活化、?