目的：体外观察原代和传代培养人牙髓干细胞形态及特性并鉴定。研究分离纯化人牙髓干细胞的方法，探讨人牙髓干细胞永生化的可能。　　 方法：体外原代培养人年轻恒牙牙髓干细胞，流式细胞仪检测细胞表面抗原(STOR-1、CD29、CD44、CD133、CD146)的表达。细胞传代过程中采用传统传代法和克隆化传代法培养人年轻恒牙牙髓干细胞，流式细胞仪分别检测两种培养方法传代第10代细胞表面抗原STOR-1的表达。细胞连续性克隆化传代培养。冻存并复苏10代以上人牙髓干细胞，倒置显微镜下观察细胞生长状态和形态特征。　　 结果：原代细胞培养7d后，倒置显微镜下观察可见有的细胞胞体短小呈梭形，有的细胞胞体狭长，呈成纤维状或星形。原代细胞培养14d后Giemsa染色，克隆细胞团形成率CFU-F计数为18-35clone/103cell。流式细胞仪检测细胞表面抗原鉴定所培养的细胞为牙髓干细胞，这些细胞特异性表达STOR-1,一般表达CD29，高表达CD44和CD146，不表达CD133。流式细胞仪检测克隆化传代培养第10代人牙髓干细胞表面抗原STOR-1的阳性率高于传统传代培养的第10代细胞的阳性率(P<0.05)。目前细胞已稳定传代28代。镜下观察所培养的细胞具有干细胞的形态特征，呈集落型生长。克隆化传代培养的第15代人牙髓于细胞冻存1年后复苏，2～3d细胞抱团呈集落状生长，4～6d细胞生长接近融合可继续传代培养，传代后细胞状态良好。　　 结论：成功培养人年轻恒牙牙髓干细胞并鉴定；克隆化传代培养能有效提纯人年轻恒牙牙髓干细胞，细胞能稳定传代28代并保持干细胞特性；长时间冻存复苏后的人牙髓干细胞仍具有干细胞的形态和特性；人牙髓干细胞可长期稳定传代培养，有永生的可能。