长春花生物碱提取剩余物中熊果酸和齐墩果酸的分离纯化工艺研究

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熊果酸和齐墩果酸为五环三萜类化合物,具有抗肿瘤、抗氧化、抗炎、保肝、降血脂和美白等作用。本文研究和探讨了从长春花生物碱提取剩余物中分离和纯化熊果酸和齐墩果酸的工艺。主要结论如下:1.确定了高效液相色谱测定熊果酸和齐墩果酸的方法:色谱柱:HiQsil C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相:乙腈:甲醇:0.5%醋酸铵=67∶12∶21(V∶V∶V),流速:1mL/min,检测波长:210nm,柱温:室温。2.确定了熊果酸和齐墩果酸分离纯化工艺路线,具体工艺参数如下:(1)确定了熊果酸和齐墩果酸提取的工艺参数:提取方法为负压混悬空化提取,通气量为0.2m3/h,提取溶剂为90%乙醇,料液比为1∶10,提取时间为25min,提取次数为3次。(2)100g干燥的长春花生物碱提取剩余物经90%乙醇提取后得到浸膏19.0g,浸膏中熊果酸的纯度为11.00%,提取率为97.57%;齐墩果酸的纯度为3.01%,提取率为99.72%。(3)采用乙酸乙酯从90%乙醇浸膏中萃取熊果酸和齐墩果酸,萃取方法为超声加搅拌,萃取次数为3次。19.0g乙醇浸膏经乙酸乙酯萃取后得到粗品4.84g,粗品中熊果酸纯度为37.32%,回收率为86.36%;齐墩果酸的纯度为10.33%,回收率为87.26%。(4)采用柱层析法进一步纯化熊果酸和齐墩果酸,具体工艺参数如下:柱层析填料为300-400目硅胶,上样量为0.2g/10g硅胶,洗脱溶剂为正己烷∶乙酸乙酯=5∶4,流速为3ml/min,收集相应流出组分。4.84g乙酸乙酯萃取物柱层析后得到样品2.28g,柱层析产物中熊果酸的纯度为68.14%,回收率为86.05%:齐墩果酸的纯度为17.79%,回收率为81.21%。(5)将柱层析得到的熊果酸和齐墩果酸混合物2.28g用无水乙醇溶解,于4℃冰箱重结晶。结晶得到熊果酸和齐墩果酸晶体混合物1.505g,其中熊果酸纯度74.15%,回收率为76.39%;齐墩果酸纯度19.91%,回收率78.56%。(6)从90%乙醇提取→乙酸乙酯萃取→硅胶柱层析→无水乙醇重结晶过程,熊果酸的总回收率为55.39%,齐墩果酸的总回收率为55.53%。
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