伏马毒素B1免疫学检测方法的研究

被引量 : 0次 | 上传用户:wuxiaoxin888
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
伏马毒素(Fumonisins)是一种主要由串珠镰刀菌(Fusarium moniliforme)产生的具有毒性及致癌性的真菌毒素,通常存在于受此类真菌污染的玉米等粮食作物及其相关的食品和动物饲料中。该毒素能够引起人畜多种疾病,严重威胁人类及动物的健康,因而越来越引起人们的关注。伏马毒素有多种结构类似物,其中伏马毒素B1(Fumonisin B1,FB1)是污染粮食作物的主要成分,也是引发毒性的主要原因。本研究在制备完全抗原及抗FB1多克隆抗体的基础上,建立了针对FB1的间接竞争ELISA、化学发光ELISA及免疫胶体金快速检测方法。由于FB1是一种不具备免疫原性的半抗原小分子,必须通过与载体蛋白的偶联获得免疫原性。首先以戊二醛法将半抗原FB1与载体蛋白钥孔血蓝蛋白(KLH)偶联成为完全抗原KLH-FB1,KLH-FB1作为免疫原免疫新西兰大白兔制备抗血清;以戊二醛法将半抗原FB1与另一种载体蛋白卵清白蛋白(OVA)偶联成为完全抗原OVA-FB1,OVA-FB1作为包被原进行血清效价检测及后续ELISA实验。间接ELISA检测血清效价,效价可达1:9600。用辛酸-硫酸铵法、Protein G亲和层析法分别纯化制备的多克隆抗体,结果表明Protein G亲和层析法纯化的多抗较纯,抗体活性也较好。利用制得的抗FB1多克隆抗体,分别建立了间接竞争ELISA检测方法与化学发光ELISA检测方法。其中,间接竞争ELISA检测在37℃包被4h,包被抗原0.5μg/mL,一抗稀释度1:4000,二抗稀释度1:6000的条件下,检测灵敏度为0.41ng/mL,检测线性范围为0.41-33.3ng/mL,与黄曲霉毒素、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮等常发真菌毒素无交叉反应。化学发光ELISA检测在包被抗原0.5μg/mL,一抗稀释度1:5000,二抗稀释度1:40000的条件下,检测灵敏度为0.14ng/mL,检测线性范围为0.14-33.3ng/mL。利用两种检测方法同试剂盒检测同时应用于样品的加标回收实验,检测样品回收率在各自线性范围内达到80%以上。此外,还进行了FB1胶体金免疫层析试纸的初步研究,制备了检测试纸,检测下限为100ng/mL。该法虽然检测限较高,但更适合于现场快速检测。
其他文献
目的 :观察松解针刺加悬灸治疗肱骨外上髁炎的临床疗效。方法 :将132例肱骨外上髁炎患者随机分为两组,治疗组66例采用松解针刺加悬灸治疗,对照组66例采用推拿治疗。结果 :治
讨论在中药前处理车间和提取车间 GMP遇到的几个问题 ,提出改造过程中 ,一部分设施设备选择注意事项。明确对直接入药的药材、干膏、辅料处理过程应在相应洁净度洁净区进行的
户外视频等生活圈媒体的兴起,使得新媒体广告成为人们关注的焦点和追捧的热点。新媒体广告效果究竟如何?本文基于五种户外视频新媒体的实证分析,对此类生活圈媒体的覆盖率、
在经历了长期的论证之后,2008年8月1日,《中华人民共和国反垄断法》(以下简称《反垄断法》)正式颁布实施。如何针对《反垄断法》的自身特点,设计行之有效的实施机制是一个非
英美文学一直是我国高校英语专业高年级学生的一门必修课,学习英美文学课有着十分重要的意义。然而,英美文学教学的现状却不容乐观,存在课时少、内容多、教学方法单一等问题。针
目的:研究类风湿性关节炎(RA)患者治疗后的康复状况在护理干预下的效果及其临床重要性分析。方法:随机抽取2012年5月-2014年5月笔者所在医院入院诊治的100例类风湿性关节炎患
违法性的本质在于结果无价值的观点,在我国刑法理论界颇为流行。法益衡量说在理论设计上存在的缺陷,使得结果无价值论在刑法解释上难以自圆其说。建立在刑法既是裁判规范,也
在对近25年国内期刊刊载的研究中小学校长培训制度相关文章查阅和分析的基础上,对中小学校长培训制度、培训体制、培训机制及中小学校长培训政策等相关概念进行整合和辨析;同
中国东方农化公司是山东省136户重点企业之一,主要从事农用化工和精细化工的科技先导型企业,国家科技部认定的高新技术企业,山东省农业银行“银桥工程”重点扶持企业,在中国
随着移动互联网行业的快速发展,UI设计日益兴起。其中UI界面设计可以说是一种符号的表达,是对所认识事物的简化,起着沟通人们与信息文化等方面的作用。由此可见对符号运用的