【摘 要】
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目的:探究脓毒症急性肺损伤肺泡Ⅱ型上皮细胞表达的缝隙连接蛋白43(Cx43)与肺泡气-血屏障通透性的关系以及microRNA-206对脓毒症急性肺损伤条件下肺泡Ⅱ型上皮细胞表达的Cx43影响。方法:动物实验分为假手术(sham)组、脓毒症(CLP)组、CLP+Cx43抑制剂(Cx43-In)组和CLP+miRNA-206模拟物(miR-206-Mi)组。我们采用的是盲肠结扎穿孔的方法来准备急性肺损
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目的:探究脓毒症急性肺损伤肺泡Ⅱ型上皮细胞表达的缝隙连接蛋白43(Cx43)与肺泡气-血屏障通透性的关系以及microRNA-206对脓毒症急性肺损伤条件下肺泡Ⅱ型上皮细胞表达的Cx43影响。方法:动物实验分为假手术(sham)组、脓毒症(CLP)组、CLP+Cx43抑制剂(Cx43-In)组和CLP+miRNA-206模拟物(miR-206-Mi)组。我们采用的是盲肠结扎穿孔的方法来准备急性肺损伤模型。造模成功后6 h,取肺组织进行HE染色,湿干重比(W/D)和支气管肺泡灌洗液(BALF)蛋白含量测定,应用免疫组化、Western blot检测肺组织Cx43的表达,RT-qPCR检测肺组织miRNA-206和Cx43 mRNA的含量。在transwell板上培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞,待培养成单层细胞后,用Cx43 mRNA抑制剂(siRNA-Cx43 mRNA)和miRNA-206模拟物预处理,再用脂多糖(LPS)进行干预,检测下室中经异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖(FITC-dextran)荧光强度来判断单层细胞的通透性。应用双荧光素酶报告基因实验,探究miRNA-206是否靶向Cx43 mRNA的3′非编码区来调节Cx43的表达,进而调控肺泡气-血屏障的通透性。结果:与sham组相比,CLP组肺泡结构破坏,肺泡壁增厚,肺间质充血、出血,炎症细胞浸润,肺间质和肺泡腔水肿,且肺泡腔内可见淡红色水肿液和中性粒细胞渗出,肺组织W/D、BALF蛋白含量增加(P<0.05),同时Cx43的mRNA和Cx43蛋白的表达量也明显增加(P<0.05),miRNA-206表达量降低(P<0.05);相对于CLP组,Cx43-In组和miR-206-Mi组肺组织的炎症反应减轻,W/D、BALE蛋白含量降低(P<0.05),Cx43的mRNA和Cx43蛋白的表达量也明显减少(P<0.05)。此外,双荧光素酶报告基因实验结果显示,Cx43 mRNA的3′非编码区存在miRNA-206的互补序列。结论:脓毒症急性肺损伤条件下肺泡Ⅱ型上皮细胞表达的Cx43增加,导致了肺泡气-血屏障的通透性增加;microRNA-206通过标靶Cx43的mRNA下调了Cx43的表达,进而降低了肺泡气-血屏障通透性。
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