金钗石斛CTK诱导花芽发育基因消减文库的构建及鉴定

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金钗石斛为兰科石斛属多年生附生草本植物,其花色艳丽,花姿优美,清香宜人,成为著名的观赏花卉,在国际花卉市场占有重要的地位。本研究应用抑制缩减杂交技术(SSH)构建了金钗石斛CTK诱导花芽分化与发育过程差异表达的cDNA消减文库,并对其进行了分析和鉴定。 本研究采用金钗石斛腋芽为材料,利用抑制缩减杂交,以用TDZ处理过的腋芽为tester,未处理对照作为driver,构建金钗石斛花芽的正向差异表达cDNA文库,共获得846个克隆。经过反向Northern杂交,将其中54个阳性克隆送出测序,最终得到38条序列;用未处理过的腋芽为tester,处理过的腋芽为driver,构建金钗石斛花芽的反向差异表达cDNA文库,共获得221个克隆。经过反向Northern杂交,将其中21个阳性克隆送出测序,最终得到12条序列。 利用BLAST在GenBank数据库中对获得的cDNA序列进行相似性比对分析,除去重复序列后,共得到50个表达差异基因,其中27个为已知;有15个基因在数据库中无同源序列;8个假定蛋白。已知或推测功能蛋白涉及了植物的多种生物学功能,主要与植物的光合作用、细胞合成代谢、基因调控、呼吸作用、花色、植物死亡、抗病与防御等功能。本研究为今后克隆与花芽分化与发育相关基因,为金钗石斛花芽分化与发育的分子机理研究奠定基础。
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