【摘 要】
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草莓（Fragaria’ananassa Duch）是一种营养价值高且具有保健作用的水果,在国内主要以设施栽培为主。草莓果实颜色是消费者评价的外观品质之一。决定草莓颜色的主要因素是花青苷的积累,而MYB类转录因子在植物花青苷合成途径中的有着重要的作用。本研究从栽培草莓品种‘红颜’中克隆出FaMYB4基因,利用生物信息学分析预测其结构与功能,通过q RT-PCR分析FaMYB4基因在草莓中的时空表达
【基金项目】
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国家重点研发项目“果实色泽与品质形成调控”（2018YFD1000200）； 国家自然科学基金“FaABCC1转运蛋白调控草莓果实细胞内积累的分子机理”（31601707）；
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草莓（Fragaria’ananassa Duch）是一种营养价值高且具有保健作用的水果,在国内主要以设施栽培为主。草莓果实颜色是消费者评价的外观品质之一。决定草莓颜色的主要因素是花青苷的积累,而MYB类转录因子在植物花青苷合成途径中的有着重要的作用。本研究从栽培草莓品种‘红颜’中克隆出FaMYB4基因,利用生物信息学分析预测其结构与功能,通过q RT-PCR分析FaMYB4基因在草莓中的时空表达模式,构建过表达载体转染到烟草和二倍体草莓‘Ruegen’进一步分析验证其功能。主要结果如下:（1）利用RT-PCR技术在八倍体草莓‘红颜’中克隆得到FaMYB4基因编码区,开放阅读框共858 bp,编码285个氨基酸。另外,还克隆得到一个FaMYB4的等位基因,与FaMYB4相比在N端缺失了4个氨基酸,命名为FaMYB4b。（2）时空表达模式分析结果表明,FaMYB4基因在草莓果实生长发育时期的表达量逐渐降低,根、茎、叶、花、果等不同器官表达分析发现FaMYB4基因在叶中的表达量最高,成熟的果实中表达量最低。（3）通过生物学信息分析显示FaMYB4分子量为32.45 k Da,理论等电点为4.97,属于不稳定亲水性蛋白,进化树分析和氨基酸比对结果显示FaMYB4属于R2R3型MYB蛋白。（4）构建PBI121-FaMYB4植物表达载体,通过农杆菌介导法转入野生型烟草,抗性筛选和PCR鉴定后获得阳性植株,利用荧光定量PCR技术对目的基因在转基因烟草中的表达量进行检测,结果显示其表达量明显高于野生型。（5）FaMYB4和Fab HLH3分别构建酵母双杂交载体p GAD424和p GBT9,进行酵母双杂试验,结果显示:p GAD424-FaMYB4和p GBT9-Fab HLH3共转酵母菌AH109,能在SD/-Leu-Trp-His-Ade生长并且用X-α-gal染色能够变蓝,说明FaMYB4和Fab HLH3为互作蛋白。而FaMYB4的等位基因FaMYB4b与Fab HLH3没有检测到相互作用,说明FaMYB4蛋白N端的4个氨基酸可能对FaMYB4蛋白和Fab HLH3形成蛋白复合体起到关键作用。（6）通过提取不同花色草莓中花的花青苷含量发现颜色越深的花中花青苷含量越高,同时FaMYB4基因在红花草莓品种中的表达量不同,颜色越深表达量越低。
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