一、基于抗体Ab-Se6节旋藻水溶性蛋白Western blotting分析方法的优化 针对钝顶节旋藻蛋白质含量高(50～75％)、种类多且丰度极不均匀等直接影响Western blotting分析的难题，通过研究优化SDS-PAGE及Western blotting分析的关键实验条件，首次建立了灵敏度高、重现性好，基于钝顶节旋藻品系Sp-3基因组外DNA(exDNA)可读框(ORF)表达蛋白Sc6抗体Ab-Sc6的节旋藻水溶性蛋白Western blotting的分析方法。即：(1)水溶性蛋白SDS-PAGE浓缩胶浓度为5％，恒压80V电泳，分离胶浓度为10％或12％，恒压140V电泳；(2)凝胶上的蛋白质以恒流100 mA经2.5 h转移至硝酸纤维素膜(NC膜)上；(3)以TMB为显色底物。利用上述优化方法，在Sp-3及其它4株钝顶节旋藻品系中均检测到数个Sc6的免疫原性蛋白，且在品系间呈现出多态性差异，从而为从蛋白质组学途径研究节旋藻exDNA的生物学意义提供了必要的技术方法与研究线索。 二、节旋藻exDNA-ORF Se6蛋白的种质免疫原性差异分析 利用上述建立的基于抗体Ab-Sc6节旋藻水溶性蛋白Westem blotting分析的优化方法，对17株钝顶节旋藻品系进行免疫原性检测及统计与聚类分析。结果显示，17株钝顶节旋藻被清晰地聚成了两大类，第Ⅰ类由工厂化养殖中生产性状差的品系Sp-1、Sp-2、Sp-6、Sp-9、Sp-10、Sp-13、Sp-14和Sp-18组成，第Ⅱ类由工厂化养殖中生产性状好的品系Sp-3、Sp-4、Sp-5、Sp-7、Sp-8、Sp-16、Sp-17、Sp-11和Sp-12组成。这一聚类结果与本实验室先前利用RAPD技术及16 S rRNA、16 S-23 S ITS、23S rRNA和cpcHID等分子标记所得的聚类结果相吻合，从而一方面表明节旋藻exDNA-ORF Sc6蛋白的免疫原性与节旋藻的分子遗传学和生产性状等密切相关，另一方面也可由此推测节旋藻的exDNA具有信号转导和环境适性应调节等功能，而非冗余。这不仅为评价节旋藻品系生产性状优劣提供了新的技术方法，而且为深入研究并阐明节旋藻exDNA的起源与进化及可能的生物学功能等提供了新的视角与途径。 三、抗体Ab-Se6免疫原性蛋白的初步分离与纯化 针对节旋藻水溶性蛋白中Sc6免疫原性蛋白含量极低、后续研究困难等问题，先利用H2O2对藻胆蛋白等有色物质的褪色作用，并结合Western blotting分析技术在Sp-3中检测到一个与Ab-Sc6免疫结合的天然蛋白，记为NS-P1；进而利用硫酸铵分级沉降、Sephacryl S-200凝胶柱层析、冷冻干燥浓缩等技术从Sp-3水溶性蛋白粗提物分离出部分纯NS-P1，首次在考马斯亮蓝染色的凝胶上检测到较清晰的NS-P1带，从而为深入开展NS-P1及其它Sc6免疫原性蛋白的分离纯化、质谱鉴定、结构与功能、互作网络等研究，揭示节旋藻exDNA的起源与进化、结构与功能等提供基础。