研究背景：溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)为直肠、结肠的浅表性、非特异性炎症性消化道疾病。随着人们生活习惯及饮食习惯的改变,该病发病率逐年升高。UC的病因涉及环境及遗传等因素,其病理生理机制尚未完全明确。目前,溃疡性结肠炎的治疗缺乏理想药物。没食子具有生干生寒、燥湿收敛、固牙止痛、清热消炎、祛腐愈伤、凉血止血、止泻止痢等功效。维吾尔医学实践中用没食子水提物治疗UC具有悠久历史。西帕依溃结安灌肠剂(KJA)处方来自维吾尔医名方“西帕依固龈液”,为《中华人民共和国卫生部药品标准—维吾尔药分册》1999年版收载品种,仅为没食子一味药制成。基于没食子能有效抑制细菌生长抑制炎症反应,本课题组在治疗口腔疾病的西帕依固龈液基础上,扩大适应证经过改进工艺、改变给药途径,开发出具有维吾尔医学特色KJA,用于治疗UC。本课题研究KJA治疗UC的作用机制及其制剂稳定性、毒性及毒理学特征。课题研究结果将为KJA工业化生产、运输、储存及在临床上安全、有效、合理应用提供试验依据。目的：(1)应用UC动物模型,从整体、组织、细胞及分子水平确证KJA治疗UC的有效性及作用机制；(2)开展KJA制剂的稳定性研究,为制剂工业化生产、储存、包装提供合理质量控制标准；(3)探讨KJA制剂的毒性及毒理学特征,为临床安全用药提供科学依据。方法：(1)作用机理研究：以雄性Wistar大鼠为受试对象,2、4-二硝基氯苯(2,4-dinitrochlorobenzene,DNCB)复合乙酸法诱导UC模型为造模方法,KJA为受试药物,设立6组,正常对照组、UC模型阴性对照组、阳性药美沙拉秦缓释颗粒剂(5-ASA)对照组、5-ASA加KJA灌肠综合治疗组、KJA灌胃组、KJA灌肠组。分别设立10天、6天、6天,共三个疗程。检测体征、体重、进食量及饮水量等一般指标；组织病理观察结肠黏膜大体形态及评分；提取结肠组织细胞检测凋亡率；高通量筛选血浆差异表达蛋白；LC-MS检测血浆中没食子酸浓度。(2)稳定性评价：以颜色、pH值、离心前后总酚含量、离心前后鞣质含量、沉淀量为指标,对开口及包装KJA分别进行60℃、40℃条件下、强光条件下影响因素试验；对包装KJA进行加速试验和常温、4℃条件下长期试验(常温试验增加薄层色谱法(TLC)定性鉴别没食子酸指标)；以总酚、鞣质含量为指标对KJA进行经典恒温法预测有效期。(3)毒性及毒理学评价：在ICR品系雌、雄小鼠进行急性毒性及最大耐受量测定试验；在雄性新西兰兔进行局部结肠黏膜刺激性试验；在雌、雄Wistar大鼠进行长期毒性试验。确定灌肠给药体积：小鼠10mL/kg,大鼠5mL/kg,兔子2.5mL/kg;体表系数法换算确定灌肠低、中、高剂量生药量：小鼠分别为5.0g/kg、7.4g/1kg、10g/kg,大鼠分别为0.2g/kg、0.8g/1kg、2g/kg,兔子分别为0.1g/kg、0.95g/kg。结果：(1)KJA对大鼠UC的治疗作用：①KJA灌肠给药显著降低DNCB复合乙酸法诱导UC模型大鼠体重减轻症状,改善饮食及饮水量；②结肠组织大体评分显示KJA灌肠给药作用优于KJA灌胃给药；③结肠组织大体评分提示KJA和5-ASA联合使用疗效更好；④组织病理学评分显示KJA灌肠组与5-ASA组均能减轻结肠组织损伤,促进UC结肠病变组织修复,组间无差异；⑤KJA灌胃、灌肠给药可缩小胰腺、脾脏系数；⑥KJA灌胃、灌肠给药显著降低结肠细胞凋亡率,KJA灌肠组作用更显著；⑦血浆蛋白差异性表达确立：相对正常组,UC模型组C4bpa上调、IgG-2a和Igh-6protein(Fragment)下调；相对KJA灌肠组,UC模型组Serpina3k上调、Igh-6protein下调；⑧灌胃、灌肠给药24小时后各组血浆样品中未检测到没食子酸,提示无药物蓄积。(2)KJA稳定性评价：①加速试验显示,质量稳定、有效期暂定2年,长期试验显示常温有效期2年,4℃有效期3年；②高温和强光可降低KJA制剂稳定性；③长期试验4℃条件下稳定性优于常温条件；④检测指标pH值、总酚、鞣质、沉点量在个别观察时间点,组间虽有显著差异(P<0.05),但均在质量标准要求范围内；⑤与开口剂型相比,包装后物理稳定性提高；⑥经典恒温法预测有效期,25℃条件下以总酚为指标1.4年、鞣质为指标0.57年；4℃条件下总酚为指标14年、鞣质为指标32年。(3)KJA毒性及毒理学特征评价：急性毒性试验显示：①最大体积10mL/kg、最大剂量10g/kgKJA灌肠小鼠无死亡；②最大耐受量(MTD)大于10g/kg;③MTD试验病理切片结果显示：与溶媒组相比,KJA高剂量组显著抑制kupffer细胞增生,显著促进肾小管上皮细胞水肿,显著抑制肠黏膜上皮增生；局部黏膜刺激性试验显示：给药14天动物无异常表现,经解剖未见与药物刺激性有关的肛门及结肠黏膜充血、红肿等现象和组织病理学变化；长期毒性试验显示：与正常组相比,在KJA低、中、高剂量组给药3、6个月及恢复期1个月末,MCV、MCHC、T-BIL及AST指标有显著影响,但未呈现与给药剂量和时间长短的关联性,且各指标均在正常参考值范围。结论：(1)作用机理研究：①KJA治疗显著改善UC肠黏膜损伤；②KJA治疗UC可能与缓解炎症及免疫机制相关,涉及C4bpa、 Igh-6、Serpina3k和IgG-2a等蛋白。(2)稳定性评价：①常规评价法和经典恒温法均确证KJA灌肠制剂质量稳定,各成分的有效期均符合制剂标准；②强光、高温能影响KJA物理化学稳定性；③包装材料可提高制剂物理稳定性。(3)毒性及毒理学特征评价：①KJA灌肠制剂无急性毒性作用,MTD大于成人用药量300倍；②KJA灌肠制剂无明显局部刺激性；③KJA灌肠制剂无长期毒性作用。研究结果提示本制剂符合制剂安全性要求,可供临床试验研究使用。