目的:采用30%乙醇制备银翘散精简方与经典方提取物,进行银翘散提取工艺评价;采用高效液相色谱法建立银翘散经典方指纹图谱,结合体外抑制IV作用实验及银翘散提取物对小鼠IV肺炎的治疗作用,从色谱峰的归属,抗流感病毒疗效等方面比较银翘散精简方与经典方的差异。材料与方法:1.采用正交试验设计筛选银翘散最佳提取工艺,采用30%乙醇提取方法制备银翘散主要药物提取物,以银翘散主要药物质量控制指标含量作为工艺评价指标,筛选与优化银翘散提取工艺。2.采用高效液相色谱法建立银翘散经典方及单味药物指纹图谱,同时测定银翘散及单味药五种有效成分,分析银翘散指纹峰分布特征及归属情况。3.采用血凝试验方法观察银翘散精简方与经典方提取物不同时间点体外直接抑制IV作用;研究银翘散精简方与经典方提取物对IV感染鸡胚的预防和治疗作用。4.采用鼻腔接种甲型IV株诱导幼龄昆明种小鼠肺炎,应用血凝试验方法检测肺组织血凝滴度,结合小鼠一般状态、肺组织病理切片、形态学、肺指数等指标,鉴定小鼠IV肺炎模型,观察不同剂量银翘散精简方与经典方提取物对小鼠IV性肺炎的治疗作用。结果:1.通过正交试验设计得知提取溶剂量及提取次数是影响出膏量重要因素,其次为提取时间,综合考虑,最佳提取工艺选用A2B2C2,即加30%乙醇回流提取2次,每次溶剂的体积为所用药材15倍、10倍,分别提取1.5小时、1小时。2.银翘散经典方提取物色谱图共有26个共有指纹峰; 26个共有指纹峰都分别归属于9个单味药材。从色谱峰归属的数量上来看,牛蒡子、金银花、连翘所属峰占主要,这与金银花、连翘、牛蒡子为银翘散君臣药;从色谱峰的归属面积上来看,牛蒡子、甘草、金银花、荆芥占主要峰值;提示了牛蒡子、金银花、甘草、荆芥的主要化学成分是银翘散抗IV作用物质基础,同时也佐证了银翘散精简方选择药物的精妙之所在及一定的抗流感病毒作用。3.银翘散精简方与经典方提取物体外均可直接抑制IV的活性,作用时间从1小时可持续到24小时,并且最大不凝血浓度在各时间点均能不同程度抑制病毒的增殖;其中银翘散精简方在6小时～12小时范围内抑制病毒效果显著,最高可达32倍,18小时后作用逐渐减弱;银翘散经典方在12小时范围内抑制病毒效果显著,最高可达32倍。4.银翘散精简方与经典方提取物抗IV感染鸡胚作用:预防和治疗作用方面,银翘散精简方与经典方提取物血凝效价与病毒对照组比较有显著性差异(P<0.05),均能对IV感染鸡胚有预防和治疗作用;银翘散精简方与经典方提取物对鸡胚的预防作用与利巴韦林比较无显著性差异(P>0.05);精简方与经典方两组间比较无显著性差异(P>0.05);银翘散精简方与经典方提取物对鸡胚的治疗作用与利巴韦林比较无显著性差异(P>0.05);精简方与经典方两组间比较无显著性差异(P>0.05)。5.各治疗组在改善小鼠一般状态、改善肺病理改变、减低IV血凝滴度、降低肺指数方面对IV小鼠有治疗作用,但与利巴韦林组比较无显著性差异(P>0.05)。结论:1.采用30%乙醇为提取溶剂对银翘散进行提取,对绝大多数药材中的活性成分均有较好的提取效果,提取溶剂量及提取次数是影响出膏量重要因素,其次为提取时间。采用高效液相色谱法同时测定银翘散经典方中五种活性成分,方法简便,重现性好,实验设计科学合理。2.银翘散经典方指纹图谱共有26个共有指纹峰,分布归属银翘散经典方中九味药材;共有峰的相对保留时间及峰面积比值,可作为银翘散主要药物复方质量控制的重要依据之一;在相同色谱条件下获得药材、中间体和制剂的色谱图各色谱峰分离较好,复方与药材的指纹图谱有良好的相关性,达到指纹图谱的技术要求。3.银翘散精简方与经典方提取物均有不同程度的体外直接抑制IV作用,直接抑制作用时间可持续24小时,在不同时间点抑制病毒效果不同,存在时—效、量—效相关性。4.银翘散精简方与经典方提取物对IV感染鸡胚均有不同程度的预防和治疗保护作用;银翘散精简方与经典方对鸡胚的预防作用和治疗作用与利巴韦林相当;两组间的抗流感病毒疗效也相当。5.银翘散精简方与经典方提取物具有减轻IV感染所引起的肺部炎症、抑制病毒复制、减轻肺病理损伤等作用。