转44p::Hpa110-42基因小麦分子检测与赤霉病抗性功能评价

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小麦赤霉病是生产上危害较大的病害,能造成小麦严重减产,品质变劣,种用价值降低,并且其产生的脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)等毒素能污染粮食,严重威胁人畜健康。因此,选育并推广抗赤霉病的小麦品种是防治小麦赤霉病流行的最经济、有效的途径。但由于易于利用的抗赤霉病的小麦种质匮乏,加之其抗性遗传方式复杂,常规育种成效不突出。近年来,一些蛋白激发子基因的分离与应用和基因工程技术的发展,为小麦抗病育种开辟了一条新途径。本研究以转Hpa110-42基因扬麦158的T1、T2代种子为试验材料,利用氯酚红溶液、PCR、Southern blotting、RT-PCR技术对其进行外源基因整合与表达检测;用单花滴注法在小麦开花期人工接种SF01-1型赤霉菌孢子液进行赤霉病抗性鉴定;分析了抗赤霉病小麦的抗性生理;并进行了农艺性状调查和T3代籽粒蛋白含量测定等,以期获得赤霉病抗性增强的转基因植株,为小麦抗赤霉病育种提供新材料。主要结果如下:1.经氯酚红溶液筛选、PCR检测、Southern blotting验证、RT-PCR检测等,分别筛选到T1代392株、T2代1597株转基因阳性株,并在部分转基因小麦体内检测到了外源基因的表达。赤霉病抗性鉴定结果表明,T2代的1057株阳性株经SF01-1型赤霉菌孢子液接种后,共筛到赤霉病抗性1级植株85株,2级植株359株,3级植株111株,4级植株501株。2.转基因植株的抗性生理分析结果表明,接种赤霉菌孢子液后,赤霉病高抗株中SOD、PAL、几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活性均有较大幅度的升高,而可溶性蛋白含量则呈下降趋势,但仍高于其他株,表明SOD、PAL、几丁质酶、β-1,3-葡聚糖酶活性的快速升高,可溶性蛋白含量的缓慢降低均有助于转基因小麦的赤霉病抗性。3.转基因小麦的株高和穗下节长降低,而穗长、单穗小穗数、千粒重和总蛋白含量增加。
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