生物钟节律是依靠核心生物钟基因cycle(Cyc)、clock(Clk)、timeless(Tim)、period(Per)、cryptochrome(Cry)等来调控生物遵循近日24小时节律的震荡循环,是生物自发性的内源性机制,维持生物自身的生理行为过程以适应外界环境的变化。本研究克隆了克氏原螯虾的三个主要生物钟基因cycle(PcCyc)、clock(PcClk)和cryptochrome1(PcCryl),基于荧光定量PCR分析了这三个时钟基因在不同光照周期下的mRNA表达模式,制备了 PcCYC蛋白的多克隆抗体,通过Western blotting与免疫组化检测了克氏原螯虾PcCYC蛋白在脑组织的表达情况。依据NCBI已上传的克氏原螯虾转录组信息(Accession code.SRP044128),使用 Cdna末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)克隆了克氏原螯虾的主要生物钟基因PcCyc、PcClk、PcCryl的全长或部分cDNA序列,并对获得的生物钟基因序列预测的蛋白序列进行功能结构、理化性质等相关的生物信息学分析。同时利用Real-time PCR技术探究不同条件光照下(12LD、24DD、72DD)克氏原螯虾生物钟基因PcCyc、PcClk、PcCryl在脑组织、眼柄组织和肝胰腺组织的mRNA表达情况,分析克氏原螯虾时钟基因的节律震荡。结果表明PcCyc与PcClk基因在相同的条件下拥有相似的mRNA水平,间接地佐证了PcCYC与PcCLK蛋白形成异二聚体共同调控CCN(the core-clock network)中基因的转录。在光照改变情况下,PcCryl基因mRNA表达差异显著。表明该基因可以感应光信号,并把光信号转变成化学信号参与时钟基因调控。另外,本研究制备的PcCYC蛋白多克隆抗体效价达到1:80000,Western blotting实验检测结果良好,可应用于免疫组化实验。