化橘红总黄酮提取纯化工艺及其功效研究

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目前,国际上对中药的利用和研究产生了浓厚的兴趣,传统中药越来越受到人们的青睐,具有很高的利用价值和潜在的市场前景。化橘红是我国特有的传统中药材,古代记载和现代研究表明化橘红内含多种活性成分,具有化痰、理气、健脾、消食、散寒等作用,始于胸中痰滞,风寒咳嗽,喉痒气喘,饮食积滞,呕吐痞闷等症。化橘红黄酮类化合物是目前研究的热点之一。因此,研究化橘红黄酮类化合物的含量,建立化橘红黄酮类化合物提取、分离、纯化新工艺与方法,探讨化橘红黄酮类化合物的结构特点,研究其药理功能均具有重要的理论和实际意义。本试验以修水化橘红为试验原料,研究并优化了化橘红总黄酮的提取方法;探讨了化橘红的分离纯化工艺;对化橘红中黄酮成分的结构进行了分析;采用多种方法研究了化橘红总黄酮的抗氧化活性,并对其止咳、化痰、消炎功能进行了研究。在单因素实验的基础上,利用响应曲面法对化橘红总黄酮提取工艺进行优化。结果表明化橘红总黄酮的最优提取条件是乙醇体积分数30%,料液比1:100g/mL,超声功率150W,超声温度80℃。在此条件下,获得化橘红黄酮最大得率为0.884%。与响应曲面法设计的试验预测值差异不显著(p>0.05),验证了实验模型的可行性。比较了5种大孔树脂对化橘红总黄酮的吸附和解吸特性,结果表明:D-312大孔树脂对化橘红总黄酮的吸附和解吸性能最好,最佳吸附工艺条件为:上样液pH4,吸附流速1.0mL/min,最佳洗脱条件为:pH7,洗脱流速1.0mL/min洗脱液体积分数80%,经D-312大孔吸附树脂纯化后的化橘红总黄酮纯度由14.16%提高到53.5%。经过聚酰胺树脂纯化的化橘红总黄酮纯度达到81.37%,是大孔吸附树脂纯化后的1.52倍。通过试验确定了HPLC梯度洗脱的条件,进样流速:0.8mL/min,柱温:30℃,流动相A为乙腈,流动相B为0.1%乙酸水溶液,检测波长:283nm,进样量:10μL。采用高效液相色谱-质谱联用的方法,对化橘红中黄酮成分的结构进行分析,初步鉴定了三个成分,分别是:异鼠李素-3-O-新橙皮苷;槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷;柚皮苷二氢查尔酮。考察了化橘红总黄酮的总还原力、DPPH自由基清除能力、对超氧阴离子和羟基自由基清除能力,化橘红总黄酮的总还原力、DPPH自由基清除力与Vc相比差异不显著(p>0.05),对羟基自由基清除能力与Vc相比差异显著(p<0.05),对超氧阴离子的清除力与Vc比较差异极显著(p<0.01)。研究了化橘红总黄酮的消炎、化痰、止咳的功效。采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀的消炎试验,低中高剂量组和阳性对照组与空白对照组相比较有极显著差异(p<0.01)。采用氨水引咳进行镇咳试验,咳嗽次数低剂量组与空白对照组之间无明显差异,低剂量组与中高剂量组有显著差异(p<0.01),中高剂量组与阳性对照组之间有明显差异(p<0.01)。气管酚红法进行化痰试验,表明化橘红总黄酮低中高剂量组和阳性对照组与空白对照组之间差异极显著(p<0.01),低中高剂量组之间无明显差异(p>0.05),化橘红总黄酮的低中高剂量组化痰效果与阳性对照组之间无明显差异(p>0.05),说明化橘红总黄酮可以起到一定的消炎、止咳、化痰的作用。
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