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目的: 食管恶性肿瘤是指食管黏膜鳞状上皮或腺状上皮产生恶变的恶性肿瘤,为人类常见的十大恶性肿瘤之一。食管癌死亡率在全球位居因肿瘤而致的死因第六位。食管癌在全球范围内具有明显地域性,我国也是食管癌的高发地区,尤其位于河北磁县,河南林县和山西阳城,发病率一直居高不下,每年新发病例约为16.7万人。临床上食管癌治疗主要有放射治疗,手术和化学治疗。但位于胸上段及颈段的食管癌,放射治疗为其最主要有效的治疗手段。由于放射治疗的疗效受很多因素的影响,寻找可以增敏的药物具有及其重要作用。近年来天然植物提取的中药作为放射增敏药物是国内外放射生物学研究热门。姜黄素是一种由人工从天然植物提取出来的化合物。研究证实,姜黄素对细胞有及其广泛的作用,能调控各种信号传导分子。因其特殊分子生物学特性,姜黄素具有抗炎,抗动脉粥样硬化,抗凝,抗氧化,抗类风湿等功效。国内外研究发现,姜黄素对多种肿瘤细胞具有增殖抑制作用,并对某些肿瘤细胞有放疗增敏的功效。本次实验就姜黄素对人食管癌Eca-109细胞系的放疗增敏与细胞周期有关机制进行研究和探讨。 方法: 1.用CCK-8法测定姜黄素对食管癌Eca-109细胞系的增殖抑制作用。待细胞贴壁加入姜黄素(浓度分别为5、10、20、40和80μmol/L)分别作用24h和48h,加入CCK-8试剂2h,置于酶标仪中检测吸光度。 2.用克隆形成实验测定姜黄素对食管癌细胞Eca-109细胞系是否具有增敏作用。实验分为姜黄素处理的实验组与不加药品的对照组,两组作用于不同射线(分别为0Gy,2Gy,4Gy,6Gy,8Gy)下,培养2周,测定食管癌细胞Eca-109细胞系的克隆形成率差异,并计算SER值。用GraphPad Prism5.0软件,选用单靶多击模型和线性二次模型,拟合生存曲线。 3.用流式细胞仪检测姜黄素与放疗共同作用对人食管癌Eca-109细胞系的凋亡率。实验分为姜黄素处理的实验组与不加药品的对照组,两组作用于不同射线(分别为0Gy,2Gy,4Gy,6Gy,8Gy)下,培养24h后收集细胞及细胞培养液,利用流式细胞仪检测细胞凋亡率。 4.用流式细胞仪检测姜黄素和放疗共同作用对人食管癌Eca-109细胞系的细胞周期。将对照组与实验组置于射线剂量4Gy照射,培养8h后收集细胞,利用流式细胞仪检测细胞周期。 结果: 1.姜黄素对人食管癌Eca-109细胞有明显的抑制作用,且存在剂量、时间依赖(p<0.05)。 2.平板克隆实验测定姜黄素对不同射线照射的食管癌细胞Eca-109细胞系克隆形成率有显著性差异(p<0.05),证实姜黄素对食管癌细胞Eca-109具有增敏性,其放疗增敏比为1.37。 3.流式细胞仪检测经姜黄素处理的食管癌细胞Eca-109细胞系较单纯照射的细胞凋亡率有统计学差异(p<0.05)。 4.流式细胞仪检测经姜黄素处理的食管癌细胞Eca-109细胞系较单纯照射的细胞周期有统计学差异,细胞周期阻滞于G2/M期。 结论: 姜黄素对人食管癌Eca-109细胞系有放疗增敏作用,其可能与姜黄素引起的细胞周期阻滞有关。