研究背景沙利度胺做为免疫调节药物（IMiDs）,已经成为多发性骨髓瘤等血液学恶性肿瘤免疫治疗和维持治疗的最重要药物之一。其联合化疗应用于实体瘤的抗癌治疗也取得相当的效果。目前沙利度胺的抗癌机理主要是作用于肿瘤微环境,增强内源性肿瘤相关抗原的免疫监视功能,募集功能性T细胞向肿瘤区域移动,同时激活T淋巴细胞活化过程,通过细胞毒性T淋巴细胞细胞毒作用,增强机体对肿瘤细胞的免疫反应。《科学》杂志上于2010年发表文章证实Cereblon为沙利度胺的致畸靶点,同时为E3泛素连接酶的底物受体,在脊椎动物物种中是保守存在的。目前T细胞的活化和免疫应答与cereblon的调控仍不清楚,我们的前期实验结果及最近的研究显示,cereblon可以被沙利度胺特异性的抑制,而沙利度胺可能通过cereblon途径参与了肿瘤微环境的T细胞免疫调节功能,发挥抗肿瘤作用。目的在本课题中,利用cereblon纯合基因敲除小鼠模型探讨cereblon在T细胞信号传导及稳态中的作用及其调控机制。内容首先以cereblon纯合基因敲除小鼠为模型,观察cereblon敲除后对小鼠表型的影响,包括四肢有无畸形,外周血及脾脏大小、细胞计数有无异常,造血系统各组织器官中cereblon在mRNA表达水平有无差异,造血系统各组织中免疫细胞分布情况有无差异;探讨cereblon纯合基因敲除后对T细胞增殖能力及Th1、Th2、Th17各类细胞因子分泌水平的影响;通过建立小鼠移植物抗宿主病模型,探讨cereblon纯合基因敲除后对T细胞对异体抗原应答反应能力的影响,进一步探讨cereblon在T细胞活化信号传导通路的作用;进一步建立T细胞稳态模型,即同种属T细胞过继性回输模型,观察cereblon纯合基因敲除后对体内T细胞生存能力的影响,并通过体外竞争性共孵育T细胞,探讨cereblon对T细胞生存的影响是否通过T细胞凋亡通路实现。最后,建立荷瘤小鼠模型,接种恶性黑色素瘤B16细胞系,比较野生型小鼠和cereblon基因敲除小鼠分别作为荷瘤小鼠时,肿瘤生长情况,以验证cereblon基因缺陷对机体抗肿瘤能力的影响。方法qRT-PCR法检测各造血系统中cereblon在mRNA表达水平。流式细胞技术检测造血系统各组织中免疫细胞分布情况。Cell Trace Violet检测T细胞增殖能力。ELISA法检测Th1、Th2、Th17等各类细胞因子分泌水平。Western-blot方法检测T细胞各活化信号通路上蛋白表达情况,以及T细胞凋亡通路上蛋白水平的变化。流式细胞技术检测对T细胞凋亡的影响。microarray分析CRBN-/-T细胞比较野生型T细胞基因表型的变化;用Fluo-4方法比较野生型T细胞和CRBN-/-T细胞中钙流的不同变化。分别建立小鼠移植物抗宿主病（GVHD）模型,小鼠T细胞稳态模型,小鼠荷瘤模型来研究cereblon缺陷对机体功能的影响。结果成功建立cereblon基因敲除的CRBN-/-小鼠模型,验证cereblon基因在各级造血细胞组织中表达情况。与野生型小鼠相比,随着年龄的增加,CRBN-/-小鼠外周血和脾淋巴细胞中Na?ve表型T细胞显著增加。进一步探索激活CRBN-/-T细胞的内在机制,成功建立体外T细胞竞争性机制模型和体内T细胞稳态模型,结果显示cereblon的缺陷可导致T细胞上调IL-2的表达,与凋亡相关蛋白的表达密切相关,从而增强了体内T细胞的增殖活化功能。我们通过建立小鼠移植物抗宿主病（GVHD）模型和小鼠荷瘤模型验证了cereblon基因缺陷可以增强T细胞对抗异体抗原的应答反应能力,可以增强机体抗肿瘤能力,但并没有引起自身免疫疾病的发生。结论Cereblon参与了T细胞的活化、增殖、分化以及细胞因子分泌等过程,进一步阐明了沙利度胺等免疫调节药物的可能作用机制,cereblon可能成为靶向治疗的新的靶点,为抗肿瘤免疫治疗提供了实验依据,为增强T细胞功能的新治疗模式提供了有效的实验动物模型。