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目的:用PCR基因分型技术分析研究昆明地区常住人口Rh阴性血型的D基因多态性,研究和探讨这些等位基因的分子基础及其Rh阴性血型的D基因在中国人中的群体频率,发现更多的D变异基因;建立和完善本地区Rh血型的PCRRHD基因检测方法,为产前诊断和临床输血提供RHD基因检测信息。方法:选择昆明地区的健康人群为研究对象,首先用血清学方法筛选出46例Rh阴性血型样本,再通过吸收放散试验从这46例Rh阴性血型样本中检测出Del表型个体。用经典的苯酚-氯仿-异戊醇方法从样本中提取基因组DNA作为PCR反应的模板,通过PCR-SSP技术检测D基因多态性,首先采用外显子—序列特异性引物扩增和检测所有样本的D基因外显子组成情况,检测结果为D基因部分存在者再采用内含子—序列特异性引物进行PCR扩增,聚丙烯酰胺凝胶电泳,硝酸银染色显带分析结果,最后通过DNA测序技术检测RHD假基因(RHDψ)和杂交RHD-CE-D基因。结果:本研究在46例Rh阴性血型样本中,D基因完整缺失者29例(63%),为真正Rh阴性;D基因完整存在者12例(26.1%),存在全部外显子,即Del表型;D基因部分存在者5例(10.9%),其中2例仅存在D基因的第10外显子,1例存在D基因的第7、9、10外显子,1例存在D基因的第4、6外显子,1例仅存在D基因的第6外显子。DNA测序结果显示,2例仅存在D基因的第10外显子的样本均为RHD-CE(3-9)-D杂合基因,1例存在D基因的第4、6外显子为RHD-CE(2-3,5,7-9)-D杂合基因,是新发现的变异等位基因。本实验在所研究的46例Rh阴性血型样本中未检测到RHD假基因(RHDψ)。结论:1.昆明地区常住人群存在高频率的Del表型和RHD-CE(3-9)-D杂合基因。2.在昆明人群发现一种新型D变异等位基因即RHD-CE(2-3,5,7-9)-D杂合基因。